One buffer for 176 enzymes. It's that easy.

Un tampon pour 176 enzymes. C’est aussi simple que ça.

Les enzymes de restriction FastDigest de Thermo Scientific forment une gamme avancée d’enzymes permettant une digestion rapide et complète de l’ADN dans un seul tampon universel. Grâce à plus de 30 ans d’expérience dans le domaine de la recherche sur les enzymes de restriction, nos enzymes FastDigest constituent un choix de prédilection pour nos clients. Les 176 types spécifiques de formulations permettent de charger directement les mélanges réactionnels sur les gels.

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Plus de 40 ans d’expérience à votre service

Avec FastDigest, vous avez accès à l’une des plus grandes gammes d’enzymes de restriction du secteur. La création du premier système d’enzymes de restriction simplifié à l’aide d’un tampon universel a été rendue possible grâce à des décennies d’expertise en enzymologie, à une vaste sélection d’isoschizomères et à la capacité à produire des enzymes d’une pureté exceptionnelle dans nos sites de fabrication de pointe.

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      Avantages des enzymes de restriction FastDigest

       Enzymes de restriction FastDigestEnzymes de restriction traditionnelles
      Système de tamponUn seul tampon universelJusqu’à 20 tampons
      Digestion double/multiple par enzymes de restrictionIllimitée : les 176 enzymes sont actives à 100 % dans un seul tamponLimitée par la compatibilité du tampon
      Temps de réaction5 à 15 minutes1 heure à une nuit
      Chargement direct sur les gelsOuiNon
      Applications en avalCompatibilité du tampon de 100 %Compatibilité partielle
      Activité StarNonOui
      Définition de l’activité1 µl d’enzyme FastDigest fractionne 1 µg de substrat d’ADN en 5 à 15 minutes dans le tampon FastDigest1 unité d’enzyme hydrolyse 1 µg d’ADN lambda en 60 minutes dans un tampon optimal pour une enzyme

      Activité de 100 % dans un seul tampon

      Le tampon FastDigest Green et le tampon Thermo Scientific FastDigest sont des tampons de digestion exclusifs qui permettent une activité de 100 % de toutes les enzymes de restriction FastDigest. Ce système permet des digestions doubles et multiples avec n’importe quelle combinaison d’enzymes. Aucune digestion séquentielle ou aucun changement de tampon n’est nécessaire.

      Digestions simples, doubles et triples en cinq minutes dans le tampon FastDigest Green

      Digestions simples, doubles et triples en cinq minutes dans le tampon FastDigest Green

      Digestions de l’ADN plasmide en cinq minutes avec :

      • Piste M : Échelle d’ADN Thermo Scientific GeneRuler Express Ladder (Réf. cat. SM1553)
      • Piste 1 : Contrôle, ADN plasmide non digéré
      • Piste 2 : FastDigest EcoRI
      • Piste 3 : FastDigest EcoRI et FastDigest KpnI
      • Piste 4 : FastDigest EcoRI, FastDigest KpnI et FastDigest SmaI

      Compatibilité du tampon de 100 % avec les applications en aval

      Les enzymes de modification de l’ADN/ARN, telles que les ligases, les phosphatases, les kinases et les ADN polymérases mésophiles, ont une activité de 100 % dans les tampons FastDigest et FastDigest Green. Ainsi, les enzymes utilisées dans les applications en aval peuvent être directement ajoutées au mélange réactionnel FastDigest. Aucun changement de tampon ni aucune étape de purification n’est nécessaire.

      Enzymes de modification de l’ADN/ARNActivité dans le tampon FastDigest Green/tampon FastDigest
      ADN polymérase I, E. coli100 %
      Fragment de Klenow100 %
      Fragment de Klenow, exo-100 %
      ADN polymérase T4100 %
      ADN polymérase T7100 %
      ADN ligase T4*75-100 %
      Phosphatase alcaline thermosensible FastAP100 %
      Polynucléotide kinase T4100 %

      * 0,5 mM d’ATP est nécessaire pour l’activité de l’ADN ligase T4.

      Digestion complète en 5 à 15 minutes

      Digestions doubles et multiples dans un seul tampon en 5 à 15 minutes :

      • Économies de temps et d’effort, productivité accrue.
      • Les temps de digestion sont fournis pour tous les types de modèles d’ADN (ADN plasmide, produit de PCR, ADN génomique).
      • Aucun modèle ne nécessite de digestion pendant la nuit.
      • L’activité Star est éliminée grâce aux temps de réaction courts.
      Enzymes de restriction traditionnelles
      Digestion séquentielle      		Enzymes de restriction FastDigest
      Un seul mélange réactionnel
      Configuration des réactions pour ApalEnv. 2 minPréparation de réaction avec FastDigest Apal et XhoIEnv. 2 min
      Incubation60 minIncubation5 min
      Préparation de réaction pour XholEnv. 2 min——
      Incubation60 min——
      DURÉE TOTALE>2 heuresDURÉE TOTALE 7 min

      Chargement direct sur les gels

      Digestions simples, doubles et triples en cinq minutes dans le tampon FastDigest Green

      Plus pratique d’emploi, le tampon FastDigest Green que nous avons mis au point offre les mêmes performances que le tampon incolore FastDigest mais permet le chargement direct du mélange réactionnel sur les gels. Le tampon 10X FastDigest Green comprend un réactif de densité et deux colorants de suivi pour le chargement direct. Le colorant bleu migre avec des fragments d’ADN de 3 à 5 kb dans un gel d’agarose à 1 % et présente un pic d’excitation de 424 nm. Le colorant jaune migre plus rapidement que des fragments d’ADN de 10 bp dans un gel d’agarose à 1 % et présente un pic d’excitation de 615 nm.

      Tampon FastDigest Green

      Mélange réactionnel contenant le tampon FastDigest Green :

      • Piste 1 : Chargé dans le puits de gel, avant l’électrophorèse
      • Piste 2 : Séparé, après l’électrophorèse

      Protocoles courts sans activité Star

      Les enzymes FastDigest associées au tampon FastDigest (Green) sont conçues pour éliminer l’activité Star :

      • Temps d’incubation court (5 à 15 min), digestions prolongées non requises.
      • Tampon universel avec pH et concentration en sel optimaux pour toutes les enzymes.
      • Concentrations optimales d’enzyme et de glycérol.

      Les enzymes de restriction traditionnelles peuvent faire état d’une activité Star ou “détendue” en raison de temps d’incubation prolongés, d’une concentration élevée d’enzyme et/ou de glycérol, de valeurs de pH élevées ou d’une force ionique faible. En éliminant tous ces problèmes, les enzymes FastDigest permettent une digestion simple, double et même triple en 5 minutes, sans aucun signe d’activité Star.

      Digestions simples, doubles et triples en cinq minutes dans le tampon FastDigest Green

      Digestion simple et double de l’ADN plasmide en cinq minutes, sans aucun signe d’activité Star

      Digestions de l’ADN plasmide en cinq minutes avec :

      • Piste 1 : FastDigest SmaI
      • Piste 2 : FastDigest EcoRI
      • Piste 3 : Digestion double FastDigest SmaI et FastDigest EcoRI
      • Piste M : Échelle d’ADN GeneRuler 1 kb Plus (Réf. cat. SM1333)
      • Piste C : Contrôle, ADN plasmide non digéré

      Références

      ApplicationsPublications
      Les enzymes de restriction FastDigest EcoRI et BamHI ont été utilisées pour préparer le vecteur de la méthode de clonage Golden Gate.Wang T., Wang D., Lyu Y., et al. (2018) Construction of a high-efficiency cloning system using the Golden Gate method and I-SceI endonuclease for targeted gene replacement in Bacillus anthracis. J Biotechnol 271:8–16. 
      L’enzyme de restriction de type IIS FastDigest BpiI (BbsI) a été utilisée pour construire l’ARNg. Kurata M., Wolf N. K., Lahr W. S., et al. (2018) Highly multiplexed genome engineering using CRISPR/Cas9 gRNA arrays. PLoS ONE 13(9):e0198714. 
      L’enzyme de restriction FastDigest TaaI a été utilisée dans l’analyse RFLP des produits de PCR.Fong WY., Ho CC., Poon WT. (2017) Comparison of Direct Sequencing, Real-Time PCR-High Resolution Melt (PCR-HRM) and PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) Analysis for Genotyping of Common Thiopurine Intolerant Variant Alleles NUDT15 c.415C>T and TPMT c.719A>G (TPMT*3C). Diagnostics (Basel) 7(2):27. 
      Fragmentation de l’ADN génomique avec des enzymes de restriction FastDigest HindIII avant la ddPCR. Li B, Kaushik S, Kalinowski P. et al. (2018) Droplet digital PCR shows the D-Loop to be an error prone locus for mitochondrial DNA copy number determination. Sci Rep 8(1):11392. 

      Ressources

      Assistance

      For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

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