Los miembros de la industria alimentaria suelen estar en primera línea de la fabricación y el procesamiento para garantizar las mejores prácticas de seguridad alimentaria. Esta responsabilidad se acentúa cuando se trata de productos como la leche en polvo para lactantes, en los que la contaminación por patógenos de enfermedades transmitidas por los alimentos (ETA) con microbios como Cronobacter y especies de Salmonella puede ser extremadamente perjudicial para estas poblaciones vulnerables. Muchos productores utilizan flujos de trabajo de detección microbiana, como la gama de ensayos Thermo Scientific™ SureTect™ PCR, para proporcionar un cribado rápido y eficiente. Estos cribados aumentan la confianza de los consumidores y mejoran la reputación de la industria, y la investigación en innovación en el desarrollo de ensayos también ayuda a enfatizar las buenas prácticas de laboratorio (GLP) para reducir la producción de residuos peligrosos.
Las especies de Cronobacter, incluida la antigua Enterobacter sakazakii (ahora C. sakazakii), se encuentran de forma natural en el medio ambiente. El Cronobacter puede prosperar en alimentos secos como la leche maternizada, los tés de hierbas, la leche en polvo y los almidones. Las personas portadoras de este microbio a menudo no muestran síntomas, pero en poblaciones vulnerables como los bebés (especialmente los recién nacidos), los pacientes inmunodeprimidos y los ancianos, la infección causa meningitis, enterocolitis necrotizante, bacteriemias y septicemia. En estos grupos, la infección puede ser mortal o dejar daños duraderos.
Los bebés prematuros y los recién nacidos son especialmente vulnerables a Cronobacter. Dado que estos bebés suelen ser atendidos en unidades de cuidados intensivos neonatales y alimentados con leche artificial por sonda, es fundamental que los fabricantes de FIP realicen pruebas de detección de patógenos FBD.
Los protocolos de análisis de patógenos FBD a menudo implican flujos de trabajo moleculares como ensayos de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) que identifican el ADN microbiano para detectar la contaminación. Tras un resultado positivo de ADN, las pruebas de seguridad requieren una identificación positiva mediante un método establecido basado en cultivos para determinar la viabilidad de los patógenos. Por lo tanto, es importante que la preparación de muestras en cualquier flujo de trabajo microbiano que los fabricantes utilicen en las pruebas de seguridad alimentaria no comprometa la viabilidad y que los resultados puedan leerse con confianza.
Al analizar las especies de Cronobacter en PIF, es importante asegurarse de que los resultados reflejen la presencia de organismos viables, incluso en niveles bajos, que podrían causar enfermedades. Dado que los ensayos de PCR informan del ADN microbiano independientemente de la viabilidad, la prueba basada en cultivos es importante para establecer la seguridad del producto.
Los métodos de referencia que analizan Cronobacter incluyen un paso de enriquecimiento para aumentar el número de microbios hasta niveles de detección antes de la prueba. Una complicación añadida para los protocolos de seguridad de los PIF es que los fabricantes suelen incluir organismos probióticos en sus formulaciones para promover la salud intestinal y reducir los patógenos de FBD. Durante la preparación de la muestra y el cultivo en medio de enriquecimiento, estos organismos probióticos también se multiplican. Esto puede reducir el pH del enriquecimiento durante la incubación, lo que puede matar los organismos objetivo. La PCR sigue detectando ADN de estos organismos no viables, pero el cultivo estándar para confirmar el resultado positivo no logra identificar colonias patógenas.
Para superar este efecto de enmascaramiento durante el paso de enriquecimiento, el método de referencia estándar para detectar especies de Cronobacter en PIF, ISO 22964:2017, requiere la adición de vancomicina para inhibir el crecimiento de cepas probióticas y mantener un pH adecuado para la viabilidad de las especies de Cronobacter. Sin embargo, para GLP es aconsejable neutralizar los medios de cultivo que contienen antibióticos antes de desecharlos o colocarlos únicamente en el flujo de residuos peligrosos.
Sin embargo, un estudio reciente realizado por científicos de Thermo Fisher Scientific ha demostrado que la vancomicina no es necesaria durante el enriquecimiento si el producto PIF no contiene probióticos. Los científicos compararon el flujo de trabajo del ensayo de PCR Thermo Scientific™ SureTect™ Cronobacter para la detección de especies Cronobacter con el método de referencia estándar, omitiendo la vancomicina del medio de enriquecimiento antes del análisis de PCR.
Tomando muestras de 300 g (27 PIF; 3 leche en polvo) enriquecidas con bajos niveles de especies de Cronobacter dañadas por desecación, el equipo encontró una buena concordancia entre los dos métodos. Dado que los resultados muestran que el rendimiento del método de ensayo de PCR SureTect Cronobacter fue comparable al método de referencia, los laboratorios de seguridad alimentaria no necesitan añadir vancomicina al medio de enriquecimiento cuando analizan Cronobacter en PIF y leches en polvo que no contienen probióticos.
Lea más sobre el análisis de la fórmula infantil en esta Nota de aplicación: Detección de Cronobacter en fórmula infantil en polvo no probiótica y leche en polvo.
Referencias
Cahill, S. M., et al. (2008). «Powdered infant formula as a source of Salmonella infection in infants», Clinical Infectious Diseases 15, 46, pp. 268-273, doi: 10.1086/524737, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18171262
CDC, Infección por Cronobacter en bebés, https://www.cdc.gov/features/cronobacter/index.html
ISO 22964:2017 Método horizontal para la detección de Cronobacter spp. https://www.iso.org/standard/64708.html
Meyer, E.L., et al. (2017). «¿Está su institución desechando medios de cultivo que contienen antibióticos?» Applied Biosafety: Journal of ABSA International, 22, pp. 164-167, https://journals.sagepub.com/doi/pdf/10.1177/1535676017735521
Autor de la entrada: Alyssa Gonzalez.
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