CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit
CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit
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CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit

El kit de qRT-PCR (transcriptasa inversa-reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa) de un paso CellsDirect™ ofrece resultados de qPCRMás información
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Número de catálogo 11753100
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100 reacciones
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El kit de qRT-PCR (transcriptasa inversa-reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa) de un paso CellsDirect™ ofrece resultados de qPCR en tiempo real específicos y de gran sensibilidad directamente a partir de las células, sin la necesidad de un paso de purificación del ARN.

Entre las características del kit de qRT-PCR de un paso CellsDirect™ se incluyen las siguientes:

Eficacia: ofrece un importante ahorro de tiempo y costes para un mayor rendimiento
Comodidad: la mezcla de enzimas incluye transcriptasa inversa SuperScript III y ADN polimerasa Platinum™ Taq
Sensibilidad: al no requerir un paso de aislamiento del ARN independiente, se aumenta la sensibilidad puesto que se minimiza la pérdida de muestras
Amplio intervalo de detección: detecta objetivos en muestras de entre una sola célula y 10 000 células
Versatilidad: compatible con una amplia variedad de líneas celulares y muestras recogidas por LCM (microdisección por captura láser)

Agilice su flujo de trabajo
En la RT-PCR cuantitativa (qRT-PCR) en tiempo real tradicional, primero se aísla el ARN de las células en un proceso lento que puede conducir a la pérdida de materia™l. Mediante el kit de qRT-PCR (transcriptasa inversa-reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa) de un paso CellsDirect™ se lisan las células y se añade el lisado completo directamente a una reacción de qRT-PCR de un solo paso con un manejo y una pérdida de muestra mínimos.

Ideal para su aplicación de qRT-PCR
La tecnología CellsDirect™ está validada para estudios de expresión génica con muestras limitadas. Los kits de qRT-PCR de un paso CellsDirect™ son especialmente valiosos para aplicaciones de alto rendimiento, puesto que eliminan los costosos y lentos pasos de purificación de ARN (véase la figura). El kit de qRT-PCR de un paso CellsDirect™ también se puede utilizar para detectar objetivos de ADN genómico.

Los kits de qRT-PCR de un paso CellsDirect™ pueden utilizarse junto con sondas de hidrólisis (por ejemplo, los primers fluorogénicos TaqMan™ o LUX™).

Nota: este kit incluye un tubo independiente de tinte de referencia ROX™. También se encuentra disponible un kit (11754-500) con tinte de referencia ROX™ equivalente incluido en la mezcla de reacción 2X.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Concentración2X
Para utilizar con (equipo)Sistema 7500 Fast, sistema 7500, BioRad iQ5, BioRad MyiQ, Corbett RotorGene, MJ Opticon, Stratagene Mx3000P, Stratagene Mx3005P, Stratagene Mx4000, BioRad iCycler iQ, Cephaid SmartCycler, MJ Chromo4, sistemas QuantStudio 3 y 5, sistemas QuantStudio 6 y 7 Pro, sistema QuantStudio 7 Flex, sistema QuantStudio 12k Flex, sistema QuantStudio 6 Flex
N.º de reacciones100 reacciones
Línea de productosCellsDirect™, Platinum™, SuperScript™
Cantidad100 reacciones
Tipo de muestraCélulas
Método de detecciónSonda de cebado
Para utilizar con (aplicación)RT-PCR
Velocidad de reacciónrápida o estándar
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• 10 ml de tampón de resuspensión
• 1 ml de potenciador de lisis
• 500 µl de ADNasa I, grado de amplificación (1 U/µl)
• 160 µl 10X de tampón de ADNasa I
• 400 l 25 mM de EDTA
• 100 µl de mezcla de Taq RT/Platinum™ SuperScript™ III
• 2 × 1,25 ml de mezcla de la reacción 2X
• 1 ml 50 mM de MgSO4
• 2 ml de agua tratada con DEPC
• 10 µl de ARN total HeLa µ(10 ng/µl)
• 100 µl de colorante de referencia ROX™ (almacenar a - 20 °C en la oscuridad)
El kit se envía con hielo seco y debe almacenarse a - 20 °C
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Figuras

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Preguntas frecuentes

If you are targeting a low-abundance gene, you may have trouble getting Ct values in a good, reliable range (Ct > 32). To increase the sensitivity of the assay, you may want to consider the following:

- Increase the amount of RNA input into your reverse transcription reaction, if possible
- Increase the amount of cDNA in your qPCR reaction (20% by volume max)
- Try a different reverse transcription kit, such as our SuperScript VILO Master Mix, for the highest cDNA yield possible
- Consider trying a one-step or Cells-to-CT type workflow (depending on your sample type)

Most times your instrument software can automatically set a proper baseline for your data. Check out our short video, Understanding Baselines, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=5BjFAJHW-bE).

In most cases your instrument software can automatically set a proper threshold for your data. Check out our short video, Understanding Thresholds, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=H_xsuRQIM9M).

There could be several reasons for no amplification from an assay or primer set. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/no-amplification.html) for more details.

There could be several reasons for amplification in a NTC well. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/amplification-no-template-control.html) for more details.

Citations & References (1)

Citations & References
Abstract
Comparison of reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction methods and platforms for single cell gene expression analysis.
Authors:Fox BC, Devonshire AS, Baradez MO, Marshall D, Foy CA,
Journal:Anal Biochem
PubMed ID:22617801
Single cell gene expression analysis can provide insights into development and disease progression by profiling individual cellular responses as opposed to reporting the global average of a population. Reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) is the  ... More
1 total citations

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