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Obtenez une digestion des protéines par la trypsine et une immunocapture à la streptavidine rapides, simples, hautement reproductibles et sensibles dans un puits unique pour toutes vos études de biomarqueurs.
Référence | Comprend |
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60110-101 | Résine SMART Digest non magnétique |
60110-102 | Résine SMART Digest non magnétique, plaque de prélèvement, plaque SPE SOLAµ |
60110-103 | Résine SMART Digest magnétique, plaque de prélèvement, plaque SPE SOLAµ |
60110-104 | Résine SMART Digest magnétique |
60110-104-NW-10PK | Bulk Magnetic beads with immobilized streptavidin and trypsin for capture and digestion and SMART Digest buffer |
Obtenez une immunocapture et une digestion des protéines rapides, simples, hautement reproductibles et sensibles dans un seul puits grâce aux kits de streptavidine Thermo Scientific™ SMART Digest™ ImmunoAffinity (IA). Ces kits ont été conçus pour relever les défis souvent associés au processus de quantification des biomarqueurs en fournissant un flux de travail simple et facile de capture-digestion qui au lieu de durer toute la nuit, ne prend que quelques heures. Le kit purifie diverses biomolécules cibles par la formation d’une forte liaison streptavidine-biotine.
La nécessité d’améliorer la capacité à identifier des biomarqueurs de faible niveau oblige la communauté analytique à gérer des niveaux extrêmement élevés d’analytes et de complexité des échantillons, ce qui rend la quantification difficile.
Comme ces protéines sont souvent présentes à de faibles niveaux dans des matrices biologiques complexes, une étape de capture d’immunoaffinité est généralement utilisée pour purifier l’échantillon et augmenter la sensibilité. Cette étape est souvent suivie par la digestion de protéines. Les processus actuels prennent souvent du temps, comprennent de multiples étapes et sont non reproductibles.
Immunocapture et digestion des protéines en un seul puitsCes kits d’IA fournissent un processus :
Dans les kits d’IA SMART Digest, les réactifs d’immunocapture et la trypsine thermostable activée par la température sont co-immobilisés sur une résine. Après l’enrichissement, l’enzyme est activée à des températures élevées pour une digestion accélérée dans des conditions de dénaturation des protéines, ce qui entraîne un flux de travail de quelques heures plutôt que d’une nuit.
How do advances in digestion, separation, mass detection & data interpretation remove roadblocks in protein characterization?
How can characterization and quantitation of bio-therapeutics can be made easier, faster and more reproducible?
We have observed the following effects with detergents:
• CHAPS – ~ 30% reduction in digest efficiency
• OGS – No reduction in digestion efficiency
• TWEEN – No reduction in digestion efficiency
• RIPA – The addition of RIPA, for ribonuclease A digestion, results in a concentration-dependent effect, where initial enzyme inhibition is overcome by improved substrate solubilization at higher concentrations only. 20% reduction in digestion efficiency.
We recommend compensating for reduction in digestion efficiency by extending the digestion time accordingly.
The SMART Digest kits are not affected by concentrations of up to 0.5M of urea. If the concentration is higher than this, we recommend that the sample is diluted to <0.5 M of urea, prior to beginning digestion using the SMART Digest kit.
The composition of the SMART Digest IA buffer is as follows:
Chemical Name (CAS No., EINECS No.): Kit Component Qty, Weight %
• Water (7732-18-5, 231-791-2): 2, 50-95%
• Glycerol (56-81-5, 200-289-5): 2, < 20%
• Tris Base (77-86-1, 201-064-4): 2, < 10%
• Tris-HCI (1185-53-1, 214-684-5): 2, < 10%
• Calcium Chloride (10043-52-4, 233-140-8): 2, < 10%
• Sodium Azide (26628-22-8, 247-852-1): 2, < 0.1%
The SMART Digest IA Kits contain an excess of enzyme capable of digesting between 200 pg and 3.5 mg of protein. As most samples will fall within this range, it is not necessary to routinely quantitate protein concentration prior to digestion.
The reason urea is needed as a first step in an in-solution protocol is to disrupt the sample and partially unfold the proteins. The proteins need to be partially unfolded so that the trypsin enzyme can have better access to the internal amino acid chain, not just the surface of the protein of interest. The reason the SMART Digest IA kits do not need urea is that it uses heat to unfold the protein.
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