Bewährte Leistung – der Phosphatase Benchmark•100 % Wärmeinaktivierung in 15 Min bei 65 °C
•Deutlich verbesserte Lagerstabilität bei niedrigeren Temperaturen (siehe Abb. 1 und 2)
•Sehr hohe spezifische Aktivität (siehe Abb. 3)
•Entfernt 5'-Phosphate aus DNA, RNA, dNTPs und Proteinen
•Aufgereinigt aus rekombinanten Quellen
•Geeignet zur direkten Restriktionsenzymverdauungen
•Keine Vektoraufreinigung erforderlich
•Die Aktivität erfordert kein zusätzliches Zink oder andere Zusätze
•Direkt geeignet für viele verschiedene Puffer
•Einfache Verarbeitung nicht inkorporierter dNTPs in PCR-Produkten vor der DNA-Sequenzierung oder SNP-Analyse
USB Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)die Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) ist eine hitzelabile alkalische Phospotase mit hoher spezifischer Aktivität aufgereinigt aus einer rekombinanten Quelle und ursprünglich isoliert aus
Pandalus Borealis (Eismeergarnele). Die Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) ist in molekularbiologischen Anwendungen wie der Dephosphorylierung phosphorylierter DNA oder RNA-Enden zur anschließenden Verwendung bei der Klonierung oder Endmarkierung von Sonden nützlich. Beim Klonen verhindert die Dephosphorylierung den Abbau linearisierter Plasmid-DNA. SAP kann auch zur Behandlung von nicht eingebundenen dNTPs in PCR-Reaktionen verwendet werden, um Templates für die DNA-Sequenzierung oder SNP-Analyse vorzubereiten.
Die Shrimp Alkaline Phosphatase hat ungefähr dieselbe spezifische Aktivität wie die Calf Intestinale Alkaline Phosphatase (CIAP) und ist wie CIAP in praktisch allen Restriktionsenzym-Reaktionspuffern aktiv. Im Gegensatz zu CIAP wird die Shrimp Alkaline Phosphatase vollständig und irreversibel inaktiviert, indem sie 15 Minuten lang bei 65 °C erhitzt wird.
Shrimp Alkaline Phosphatase ist besonders nützlich bei der Vorbereitung von PCR-Produkten für Anwendungen, die Sequenzierung, SNP-Analyse oder Beschriftungsmethoden umfassen. In der Regel stören überschüssige dNTPs, die nach der PCR verbleiben, nachfolgende enzymatische Reaktionen, die die DNA-Synthese betreffen. SAP dephosphoryliert alle verbleibenden dNTPs aus dem PCR-Gemisch in einem einfachen Schritt.
Wir freuen uns, Ihnen eine rekombinante Version unseres Phosphatase-Benchmarks anbieten zu können. Rekombinantes SAP macht die Tierbeschaffung unnötig und bietet die zusätzlichen Vorteile einer verbesserten Lagerstabilität und Chargenkonsistenz bei außergewöhnlicher enzymatischer Aktivität und 100%iger Wärmeinaktivierung.
Eigenschaften:Molekulargewicht: Homodimer. Monomer ist 55 kDa gemäß Aminosäuresequenz.
Optimaler pH-Wert: 10,4 in Glycin-Puffer und pH 8,0 in Tris-Puffer.
Optimale Temperatur: 37 °C
Wärmeinaktivierung: 65 °C für 15-minütige
Inhibitoren: 10 mM DTT, 0,1 % β-ME
-Reaktionsbedingungen: Aktiv in NaCl, KCl. Erfordert Mg
2+ für höchste Aktivität.
Quelle:Rekombinant
Reinheit:Getestet auf kontaminierende Endonukleasen, Exonukleasen und Ribonukleasen.
Lagerpuffer:25 mM Tris-HCl (pH 7,5), 1 mM MgCl2, 50 % Glycerin.
Assay-Bedingungen:Das Reaktionsgemisch enthält 100 mM Glycin, pH 10,4, 1 mM MgCl
2, 1 mM ZnCl
2, 10 mM p-Nitrophenylphosphat und 0,001-0,1 Einheiten Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP). Überwachte Änderung der Absorption bei 405 nm (3050 μl Reaktionsvolumen).
Definition der Einheit:Eine Einheit ist die Enzymmenge, die die Hydrolyse von 1 μmol p-Nitrophenylphosphat pro Minute in Glycin-Puffer (pH 10,4) bei 37 °C katalysiert.
Konzentration:1 Einheit/μl
Funktionstest:Dephosphorylierung von restriktionsenzym-verdauten Plasmiden (5 – 20 pmol von 5'-Enden, 0,1 -0,5 Einheiten/pmol 5'-Enden). Reduzierte Re-Ligation auf < 0,5 % verglichen mit der unbehandelten Kontrolle.
PROTOKOLL ZUR DEPHOSPHORYLIERUNG VON NUKLEOTIDEN UND DEGRADATION VON PRIMERN VOR SEQUENZIERUNGEN ODER SNP-ANALYSEN:
Siehe
USB ExoSAP-IT-Protokoll, Benchmark der PCR-Aufreinigung.
Im Lieferumfang von ExoSAP-IT ist eine Lizenz zur PCR-Aufreinigung mit Exonuklease I und SAP inbegriffen.
Funktionell getestete 10X SAP-Reaktionspuffer (im Lieferumfang enthalten, PN 70103):
200 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM MgCl
2.
Funktionell getestete SAP-Verdünnungspuffer (1 ml enthalten, PN 72761):
50 mM Tris-HCl (pH 8,0).
Referenzen:1. RUAN, C. C., SAMOLS, S. B. AND FULLER, C. W. (1990)
Kommentare 17, (Nr. 1), United States Biochemical Corporation, Cleveland, OH.
2. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994)
Nucleic Acids Res. 22, 4354-4355.
3. HANKE, M. AND WINK, M. (1994)
BioTechniques 17, 858-860.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.