L-Proline for SILAC

Thermo Scientific schwere und leichte Aminosäuren werden verwendet, um SILAC-Kits die Proteinexpression durch massenspektrometrische Mengenbestimmung durch Isotopenmarkierung zu analysieren. Diese lyophilisierte L-Prolin-Zubereitung reicht für ein SILAC-Experiment.

Allgemeine Merkmale schwerer und leichter Aminosäuren zur SILAC-Markierung:

• Effizient – 100%ige Markierungsintegration in Proteine lebender Zellen
• Flexibel – Verschiedene Isotope schwerer und/oder leichter Aminosäuren für Arginin, Lysin, Leucin und Prolin ermöglichen die Quantifizierung von Peptiden aus Proteasen in MS-Qualität
• Multiplex-Fähigkeit – Es stehen mehrere alternative Isotope von Arginin und Lysin zur Verfügung, die die Analyse mehrerer Behandlungsbedingungen in jedem Experiment ermöglichen
• Hochwertige Supplemente – Schwere Aminosäuren mit > 99 % Isotopenreinheit

Die stabile Isotopenmarkierung mit Aminosäuren in der Zellkultur (SILAC) ist eine leistungsstarke Methode zur Identifizierung und Quantifizierung relativer differenzieller Veränderungen in komplexen Proteinproben. Dieser Ansatz umfasst die metabolische In-vivo Integration von „schweren“ ¹³C- oder ¹⁵N-markierten Aminosäuren in Proteine, gefolgt von der Massenspektrometrie (MS) zur beschleunigten und umfassenden Identifizierung, Charakterisierung und Quantifizierung von Proteinen.

Thermo Scientific schwere und leichte Aminosäuren für SILAC werden zusammen mit speziellen Zellkulturmedien verwendet, die in essenziellen Aminosäuren nicht ausreichend vorhanden sind. Schweres und leichtes L-Lysin bzw. L-Arginin sind die am häufigsten für die SILAC-Analyse tryptischer Peptide verwendeten Aminosäuren. Bis zu drei verschiedene Versuchsbedingungen können ohne Weiteres mit unterschiedlichen Lysin- und Arginin-Isotopen analysiert werden. Für Lysin-Dreiplex-Experimente werden 4,4,5,5-D₄ L-Lysin und ¹³C₆ ¹⁵N₂ L-Lysin zur Erzeugung von Peptiden mit 4- und 8-Da-Massenverschiebungen verwendet, verglichen Peptiden, die mit leichtem Lysin erzeugt wurden. Für Triplex-Experimente mit Arginin werden im Vergleich zu mit leichtem Arginin erzeugten Peptiden ¹³C₆ L-Arginin und ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-Arginin zur Erzeugung von Peptiden mit einer 6 Da- bzw. 10 Da-Massenverschiebung verwendet. L-Leucin ist eine der häufigsten Aminosäuren in Proteinsequenzen und kommt ebenfalls oft bei der SILAC-Markierung zum Einsatz. Prolin ist eine nicht-essentielle Aminosäure, die manchmal zu SILAC-Medien hinzugefügt wird, um die metabolische Umwandlung von schwerem Arginin in schweres Prolin in Säugetierzelllinien mit hoher Arginin-Dehydrogenase-Aktivität zu verhindern.

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