Pierce™ SDS-PAGE Sample Prep Kit

Das Thermo Scientific Pierce SDS-PAGE Probenvorbereitungskit entfernt schnell und einfach hohe Mengen an Salzen, Vergällungsmitteln, Detergenzien und andere Pufferkomponenten, die die Gelelektrophorese von Polyacrylamiden stören.

Merkmale des SDS-PAGE Probenvorbereitungskits:

• Eliminiert durch inkompatible Kontaminanten hervorgerufene Gelartefakte – entfernt Farbstoffe, Reduktionsmittel, Detergenzien, Zucker, Glycerin, Guanidin, Harnstoff und Ammoniumsulfat, um reproduzierbare Ergebnisse durch SDS-PAGE-Analyse zu erzielen
• Kompatibel mit BCA-Proteinassay – ermöglicht die Proteinquantifizierung der verarbeiteten Probe vor der Gelbeladung
• Anreicherung verdünnter Proteinlösungen – konzentriert Proteinproben für die SDS-PAGE-Analyse um das Sechsfache in weniger als 20 Minuten
• Leistungsstark und flexibel – Verarbeitung von 2 bis 350 µl Probe, die bis zu 70 µg Protein enthält; Rückgewinnung von 75 bis 85 % des Gesamtproteins in 50 µl Elutionspuffer
• Praktisches, vollständiges Kit – enthält PAGEprep Harz, DMSO, Zentrifugationsbecher und Probenbeladungspuffer

Das SDS-PAGE Probenvorbereitungskit bietet eine einfache und effektive Methode zur Konzentration von Proben bei gleichzeitigem Entfernen von Chemikalien wie Säuren und Basen, Detergenzien, Guanidin und Ammoniumsulfat, die die SDS-PAGE-Analyse beeinträchtigen. Das firmeneigene PAGE-prep Harz bindet Protein in Gegenwart von Dimethylsulfoxid (DMSO). Störende Kontaminanten werden anschließend entfernt, indem das proteingebundene Harz in einem einfach zu verwendenden Zentrifugationsbecher gewaschen wird. Proteine werden in einem Puffer eluiert, der mit dem Pierce BCA Protein-Assay kompatibel ist und die Quantifizierung eines Teils der verarbeiteten Probe ermöglicht. Die eluierten Proteine können dann mit dem Probenpuffer kombiniert und im SDS-PAGE-System der Wahl analysiert werden.

Enthält:
• PAGEprep Harzaufschlämmung, DMSO-Lösung, Elutionspuffer, Probenpuffer, Zentrifugationsbecher und Entnahmeröhrchen

Anwendungen:
• In Guanidin·HCl aufgelöste Einschlusskörperchen
• Proben, die Puffer mit niedrigem pH-Wert, Thiocyanate oder Harnstoff enthalten
• Proteine, die in Ammoniumsulfat ausgefällt sind
• Konzentration verdünnter Proteinlösungen

Das SDS-PAGE Probenvorbereitungskit verwendet ein einzigartiges Harz aus modifizierter Kieselgur, das Protein in Gegenwart von DMSO bindet. Das einfache Protokoll umfasst die Kombination von 2 bis 350 µl Probe, die bis zu 70 µg Protein enthält, mit 20 µl PAGEprep Harz in DMSO (im Lieferumfang enthalten). Proteine in der Probe binden innerhalb von 3 bis 5 Minuten an das Harz. Danach werden die nicht gebundenen kontaminierenden Chemikalien ausgewaschen. Zum Schluss werden die gereinigten Proteine aus dem Harz in 50 µl Elutionspuffer rückgewonnen. Die rückgewonnene Proteinprobe kann dann mit dem mitgelieferten 5x-Probenbeladungspuffer zur Gelbeladung (oder einem anderen Probenbeladungspuffer) gemischt werden. Das Verfahren ermöglicht auch die Konzentration von verdünnten Proteinproben auf das Sechsfache, wodurch mehr Protein pro Well geladen werden kann. Darüber hinaus ist der Thermo Scientific Pierce BCA Protein-Assay (Art.-Nr. 23225) mit dem Elutionspuffer kompatibel und kann zur Bestimmung der endgültigen Proteinkonzentration vor der Gelbeladung verwendet werden.

Für eine zuverlässige SDS-PAGE-Analyse müssen Proteinproben in einem von störenden Substanzen freien Puffer und in für die Analyse geeigneten Proteinkonzentrationen vorbereitet werden. Viele Störsubstanzen, die sich nicht mit den für die Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) typischen Probenpuffern vertragen, lassen sich mit herkömmlichen Methoden zur Probenvorbereitung nur schwer entfernen. So würden beispielsweise Proteinproben, die 6 M Guanidin-HCl enthalten, beim Mischen mit Laemmli-Puffer für SDS-PAGE ausgefällt, was dazu führt, dass die Probe schlecht auf einem Gel verläuft. Glücklicherweise können Proben, die eine breite Vielfalt von störenden Chemikalien wie chaotrope Mittel, Detergenzien, Lipide, pH-Extremwerte und Salze enthalten, mit dem SDS-PAGE Probenvorbereitungskit innerhalb weniger Minuten gereinigt werden.

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