SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix para qRT-PCR proporciona la capacidad de alta temperatura de la transcriptasa inversa SuperScript™ III en un formato SuperMix optimizado para la síntesis de la primera cadena de ADNc para su uso en RT-PCR cuantitativo en tiempo real (qRT-PCR). La sencilla configuración de la reacción, que permite ahorrar tiempo, utiliza solo dos tubos: una mezcla de reacción 2X y una mezcla de enzimas.

La mezcla de enzimas de transcriptasa inversa
SuperScript™ III, incluida en la mezcla de enzimas RT, es una versión de M-MLV RT que se ha diseñado para reducir la actividad de ARNasa H y proporcionar una mayor estabilidad térmica. La enzima se puede utilizar para sintetizar ADNc en un intervalo de temperatura de 42–60 °C, y proporcionar una mayor especificidad, mayor producción de ADNc y más cantidad de producto de cadena completa que otras transcriptasas inversas. Como la transcriptasa inversa SuperScript™ III no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosómico, se puede emplear para sintetizar ADNc de ARN total. RNaseOUT™ El inhibidor de ribonucleasa recombinante, también incluido en la mezcla de enzimas, es una proteína inhibidora de la ARNasa que protege contra la degradación del ARN objetivo debido a la contaminación por ribonucleasa de la preparación del ARN.

Mezcla de reacción
La mezcla de reacción RT 2X incluye oligo(dT)₂₀, hexamers aleatorios, MgCl₂y dNTP en una formulación tampón que ha sido optimizada para qRT-PCR. ARNasa H E. coli se suministra como un tubo independiente en el kit para eliminar la plantilla de ARN de la molécula híbrida ADNc:ARN después de la síntesis de la primera cadena. Se ha demostrado que esto aumenta la sensibilidad de qRT-PCR.

Uso de SuperMix de síntesis de primera cadena SuperScript™ III
Esta formulación de SuperMix se puede utilizar para cuantificar menos de 10 copias de un gen objetivo en qRT-PCR, con un amplio rango dinámico que admite una cuantificación precisa de ARNm de alto número de copias de hasta µ1 g de ARN total Los reactivos se proporcionan para reacciones de transcriptasa inversa 50 o 250 de 20 µl cada uno.