La proteasa AcTEV™ reconoce específicamente una secuencia de siete aminoácidos (Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly, con disociación entre Gln y Gly), por lo que es útil para eliminar etiquetas de afinidad de proteínas de fusión. La proteasa AcTEV™ es una versión mejorada de la proteasa del virus de grabado del tabaco (TEV) que es muy específica del centro, muy activa y significativamente más estable que la proteasa nativa del TEV, lo que resulta en una mayor actividad a largo plazo. Características de la proteasa AcTEV™:

• Actividad de disociación altamente específica
• Mejora de la estabilidad enzimática para una actividad de proteasa prolongada (ver figura)
• Actividad a lo largo de un amplio intervalo de temperaturas (de +4 °C a 30 °C) y pH (de 6,0 a 8,5)
• Secuencia de seis histidinas para facilitar su extracción de la muestra de proteína digerida
• Pureza de una sola banda superior al 85 % con contaminación de proteasa no específica.

Aplicaciones
La incubación con proteasa AcTEV™ libera la proteína de interés de la etiqueta de fusión. Esta es una manera eficaz de eliminar las etiquetas de solubilidad, secreción, detección y purificación de proteínas recombinantes.

Especificaciones enzimáticas
Purificadas a partir de E. coli que expresan el gen de la proteasa AcTEV™.

Definición de unidad
Una unidad de proteasa AcTEV™ disocia el 85 % de un sustrato de control de 3 µg en 1 h a 30 °C.

Condiciones de reacción de la unidad
50 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 0,5 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 3 µg de sustrato de control y 1 unidad de enzima en 30 µl durante 1 h a 30 °C. La proteasa AcTEV™ se prueba funcionalmente para comprobar la ausencia de cualquier actividad de proteasa inespecífica.