La ligasa de ADN T4 cataliza la formación de enlaces fosfodiéster en presencia de ATP entre ADN bicatenario con extremos 3´-hidroxilo y 5´-fosfato. El exclusivo tampón de ligasa de ADN T4 optimiza la ligadura, que puede realizarse en 5 minutos. Los ácidos nucleicos de una sola cadena no son sustratos para esta enzima.

Aplicaciones
Clonación (ligadura con extremo romo o extremo cohesivo) y adición de enlaces o adaptadores a ADN de extremo romo


Purificada a partir del lisógeno lambda de E. coli NM989

Pruebas de rendimiento y calidad
Endodesoxirribonucleasa, ensayos de endodesoxirribonucleasa 3´y 5´; ligadura de eficacia probada

Definición de la unidad
Una unidad cataliza el intercambio de pirofosfato marcado como 1 nmol ³²P en ATP en 20 min a 37 °C. Una unidad es igual a aproximadamente 300 unidades de ligadura de extremo cohesivo.

Condiciones de reacción unitarias
66 mM de Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM de MgCl₂, 10 mM de DTT, 66 µM de ATP, 3,3 µM de pirofosfato marcado como ³²P y enzima en 0,1 ml durante 20 min a 37 °C.