La proteína A/G Plus agarosa Thermo Scientific Pierce es una resina de proteína A/G agarosa granulada de capacidad excepcionalmente alta para su uso con diversos métodos de purificación de anticuerpos por afinidad.

Características de la proteína A/G Plus agarosa:

• Proteína A/G: la proteína de fusión recombinante inmovilizada de los dominios de unión de anticuerpos de la proteína A y la proteína G permite la purificación de IgG policlonal de casi cualquier especie de mamíferos
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada entrecruzada al 6 % (CL-6B), la resina más demandada para los métodos de purificación de proteínas por afinidad
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína A/G mediante enlaces covalentes resistentes a la lixivación y sin carga, lo que da como resultado una baja unión inespecífica que permite muchos usos sin reducción de la producción
• Alta capacidad: esta variedad «Plus» de proteína A/G agarosa Pierce tiene una carga muy densa de proteína A/G inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión superior a 50 mg de IgG humana por ml de resina

La proteína A/G Plus-agarosa lus Pierce consiste en proteína A/G purificada inmovilizada covalentemente a una alta densidad en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de alta calidad (CL-6B). Ya que la proteína A/G combina los dominios tipo inmunoglobulina de las proteínas A y G, la resina es efectiva para la purificación por afinidad de los anticuerpos de IgG de un gran número de especies huésped mamífero.

La proteína A/G es una proteína genéticamente modificada que combina los dominios de unión de IgG de la proteína A y la proteína G. La proteína de fusión se expresa en E. coli. La proteína A/G contiene cuatro dominios de unión de la Proteína A y dos de la Proteína G de la región Fc, lo que produce una masa final de 50.460 daltons (de 40 a 45 kDa por SDS-PAGE). La proteína A/G no depende tanto del pH como la proteína A, pero, no obstante, tiene las propiedades aditivas de las proteínas A y G. La proteína A/G se une a todos los subtipos de IgG humana, lo que la convierte en la opción idónea para purificar anticuerpos de IgG monoclonales y policlonales cuyo subtipo no se ha determinado.

La proteína A/G Plus agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que cuenta con diversas ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización de ligandos. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína A/G inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

Propiedades de la agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: La presión manométrica indicada de un aparato de cromatografía líquida puede estar midiendo la presión total del sistema en lugar de la caída de presión en la columna).

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