Los reactivos BS3-d0/d4 Thermo Scientific Pierce forman un conjunto de variedades de masa pesada (deuterada) y ligera del entrecruzador reactivo de amina BS3 que facilita la identificación de péptidos entrecruzados mediante espectrometría de masas.

Los reactivos BS3-d0/d4 son análogos de masa del popular entrecruzador BS3 (n.º de referencia 21580). La variedad d-Zero (BS3-d0) posee átomos de hidrógeno ordinarios, mientras que la variedad d-four (BS3-d4) contiene cuatro átomos de deuterio que la hacen exactamente cuatro unidades de masa de hidrógeno más pesada. Cuando las dos variedades se mezclan y se utilizan para entrecruzar proteínas que interactúan, se producen patrones de masa distintivos que permiten la identificación inequívoca de las moléculas entrecruzadas.

Características de los reactivos BS3-d0/d4:

• BS3 marcado con deuterio y su análisis estándar solo de hidrógeno: especialmente fabricado para entrecruzar el análisis entre la estructura y la función de las proteínas por espectrometría de masas
• Fácil identificación de fragmentos entrecruzados: las masas de péptidos que difieren en cuatro unidades identifican inequívocamente entrecruzamientos en lugares específicos dentro de una estructura de interacción de proteínas
• Instrucciones específicas de la aplicación: guían al usuario principiante a través de la aplicación
• El método requiere tan solo microgramos de proteína: una alternativa excelente a NMR o a los métodos basados en cristalografía de rayos X que requieren cantidades grandes de proteína, disolventes especiales o formación de cristales

La adición de una mezcla equimolar de dos agentes de entrecruzamiento idénticos que difieren solo en el número de átomos de deuterio en sus estructuras químicas proporciona un potente método para identificar péptidos de baja abundancia, entrecruzados individualmente por espectrometría de masas. Las interacciones de proteínas de entrecruzamiento con los reactivos BS2G-d0/d4 generan patrones de masa distintivos en los que los péptidos de entrecruzamiento difieren en cuatro unidades de masa después de la digestión enzimática del complejo de proteínas o proteínas de entrecruzamiento. El análisis adicional de los productos de reacción puede producir información de estructura tridimensional de baja resolución.

Bs3-d0/d4 y los reactivos BS2G-d0/BS2G-d4 son agentes de entrecruzamiento homofuncionales, reactivos a la amina, no escindibles, solubles en agua con longitudes de agente separador definidas. Estos reactivos pueden actuar como reglas moleculares para la estimación de las relaciones espaciales en estudios de estructura-función de proteínas. Tanto la luz como los análogos deuterados reaccionan eficazmente con la amina primaria (—NH2) a pH 7-9 para formar enlaces de amida estables. Las proteínas generalmente contienen varias aminas primarias en la cadena lateral de los residuos de lisina (K) y el terminal N de cada polipéptido que están disponibles como objetivos para los dos grupos reactivos del éster sulfo-NHS que se encuentran en cada uno de estos reactivos. Estos reactivos se suministran en forma de sal de sodio y son solubles en agua a una concentración de hasta 10 mM.

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