La exonucleasa del gen 6 T7 hidroliza el ADN bicatenario de forma no procesable en la dirección 5'→3 'de los nucleótidos 5'-fosforilo o 5'-hidroxilo liberando oligonucleótidos y mononucleótidos, hasta que aproximadamente el 50 % del ADN es soluble en ácido. También degrada los nucleótidos en las brechas y cortes del ADN bicatenario del extremo 5' y el ARN de los híbridos ARN:ADN en la dirección 5'→3'.
La exonucleasa del gen 6 T7 es similar a la exonucleasa lambda, ya que cataliza la hidrólisis gradual del ADN bicatenario a partir de los mononucleótidos 5' de liberación del extremo 5'. Sin embargo, a diferencia de la exonucleasa lambda, la enzima tiene baja capacidad de procesamiento y eliminará tanto el extremo 5'-hidroxilo como el 5'-fosforil.
También degrada el ARN y el ADN de los híbridos ARN:ADN en la dirección 5'→3' pero no puede degradar el ARN bicatenario o monocatenario.
Esta enzima se ha utilizado para generar plantillas de ADN monocatenarias para secuenciación o análisis SNP.
Propiedades Peso molecular: 32 kDa pH óptimo: 7,5 Temperatura óptima: 37 °C Inactivación: 75 °C durante 10 min o añada 2 µl de 0,5 M de EDTA para un volumen de reacción de 50 µl.
Inactivación Calentamiento a 75 °C durante 10 min o añadiendo 2 µl de 0,5 M de EDTA para un volumen de reacción de 50 µl.
Pureza Superior al 95 % pura según lo determinado por SDS-PAGE. Probada para endonucleasas contaminantes y ribonucleasas.
Tampón de almacenamiento 50 mM de KPO4 (pH 6,5), 1 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 50 % de glicerol.
Condiciones del ensayo La mezcla de reacción (50 µl) contiene 50 mM de Tris-HCI (pH 8,1), 5 mM de MgCl2, 20 mM de KCI, 5 mM de 2-mercaptoetanol, ADN bicatenario y enzima. La incubación se produce a 37 °C durante 15 min
Definición de la unidad Una unidad es la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 nmol de nucleótido soluble en ácido en 15 min a 37 °C en condiciones de ensayo estándar.
Concentración 50 unidades/µl
Fuente La cepa E. coli contiene un clon sobreproductor de la exonucleasa del gen 6 T7
Test funcional Conversión de 0,5 pmol de λ ADN a media molécula monocatenario por 75 unidades de enzima en 30 min a 37 °C. Verificación por electroforesis en gel de agarosa.
Aplicaciones: 1. Digestión escalonada controlada de ADN bicatenario desde extremo 5' 2. Generación de plantillas de ADNss para secuenciación o análisis de SNP
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
Enzima
Exonucleasa
Tampón compatible
Tampón de almacenamiento
Cantidad
10 kU
Tipo de producto
Exonucleasa T7
Unit Size
10 kunits
Contenido y almacenamiento
Se envía con hielo seco. Almacenar a -20 °C.
Figuras
Documentos y descargas
Certificados
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