La ADN polimerasa termoestable USB™ CycleSeq™ es una ADN polimerasa termoestable que no contiene exonucleasa e incorpora ddNTP con un nivel marcado de eficacia superior a las ADN polimerasa termoestables convencionales.Esto permite patrones de banda de secuencia más uniformes y fáciles de leer, lo que facilita la identificación de anomalías en secuencias.

La ADN polimerasa termoestable CycleSeq USB se puede sustituir por la ADN polimerasa ThermoSequenase, ya que ambas enzimas incorporan nucleótidos modificados (véase la Fig. 1).

La ADN polimerasa CycleSeq, al igual que la ADN polimerasa Thermo Sequenase, incluye pirofosfatasa inorgánica Thermoplasma acidiophilum (TAP).La TAP es termoestable y convierte el pirofosfato en ortofosfato, una característica útil durante las reacciones de secuenciación de ciclos en las que se producen pirofosfatos.

La ADN polimerasa termoestable CycleSeq USB es útil para la secuenciación de ciclos (secuenciación de Sanger), ya que produce datos de secuencias con intensidades de banda uniformes que permiten lecturas de secuencias más largas y precisas.También es útil para protocolos de extensión de cebadores durante la identificación de genotipos de SNP.

Origen:
Recombinante

Pureza:
Superior al 95 % de pureza según lo determinado por SDS-PAGE.

Tampón de almacenamiento:
20 mM de Tris-HCl, pH 8,5, 0,1 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 100 mM de KCl, 0,053 unidad/μl de pirofosfatasa inorgánica de Thermoplasma acidophilum, glicerol al 50 % y estabilizadores.

Condiciones del ensayo:
La mezcla de reacción contiene 25 mM de TAPS, pH 9,3, 50 mM de KCl, 2 mM de MgCl₂, 1 mM de Β-ME, 200 μM de dATP, 200 μM de dGTP, 200 μM de dTTP, 100 μM de dCTP, 0,05 μl [α33P] dCTP (10 μCi/μl), 400 μg/ml de ADN activado y ADN polimerasa termoestable CycleSeq.Tras la incubación a 74 °C durante 10 minutos, se determina el material insoluble en ácido (volumen de reacción de 50 μl).

Definición de la unidad:
Una unidad de enzima se define como la cantidad de enzima necesaria para catalizar la incorporación de 10 nmol de dNTP en forma insoluble en ácido en 30 minutos a 74 °C con unas condiciones de ensayo estándar.

Concentración:
32 unidades/μl

Prueba funcional:
Probado funcionalmente para cumplir o superar las especificaciones para su uso en la secuenciación del cebador colorante.Las especificaciones de liberación se basan en la longitud de la secuencia, la intensidad de la banda y la calidad de la secuencia.La secuencia también debe estar libre de bandas de fondo lo suficientemente fuertes como para interferir en la interpretación de la secuencia.