La sonda destiobiotina-GTP ActivX Thermo Scientific Pierce etiqueta covalentemente el sitio activo de las GTPasa y las subunidades de GTPasa de los receptores acoplados a las proteínas G, lo que ofrece un enriquecimiento selectivo que permite identificar y perfilar las clases de enzimas diana en las muestras o evaluar la especificidad y afinidad de los inhibidores enzimáticos.

Características de la sonda destiobiotina-GTP ActivX:

• Específico: etiquete solo las lisinas de sitio activas de las proteínas de unión de nucleótidos
• Uso compatible: para el etiquetado in vitro de enzimas GTPasa derivadas de células o tejidos.
• Flexible: uso con flujos de trabajo Western blot o de espectrometría de masas (MS)

Aplicaciones de la sonda destiobiotina-GTP ActivX:
• Amplio enriquecimiento de proteínas de unión a GTP de tejidos, células y proteomas subcelulares
• Enriquecimiento de enzimas basado en la función
• Perfilado de decenas a cientos de inhibidores diana

La estructura de la sonda destiobiotina-GTP ActivX consiste en una biotina modificada unida al nucleótido por un enlace de acilo-fosfato lábil. Después de la eliminación de los nucleótidos GTP o GDP de las enzimas, la sonda destiobiotina-GTP puede utilizarse para modificar covalentemente los residuos de lisina conservados en el sitio de unión de nucleótidos GTPasa. La destiobiotina-GTP puede enriquecer, identificar y perfilar selectivamente las clases de enzimas objetivo en las muestras. La preincubación de muestras con inhibidores de moléculas pequeñas que compiten con sondas de sitio activo se puede utilizar para determinar la afinidad de unión de los inhibidores y la especificidad del objetivo.

La evaluación del etiquetado de sitios activos puede realizarse mediante Western blot o espectrometría de masas (MS). Para el flujo de trabajo Western blot, las proteínas etiquetadas con destiobiotina se enriquecen para el análisis SDS-PAGE y la posterior detección con anticuerpos específicos. Para el flujo de trabajo de MS, las proteínas etiquetadas con destiobiotina se reducen, se alquilan y se digieren enzimáticamente a péptidos. Solo los péptidos de sitio activo etiquetados con destiobiotina se enriquecen para su análisis mediante LC-MS/MS. Ambos flujos de trabajo se pueden utilizar para determinar la unión de los inhibidores diana, pero solo el flujo de trabajo de MS puede identificar los objetivos y no inhibidores diana globales.

Más datos del producto
• Enriquecimiento GTPasa utilizando una nueva sonda de sitio activo

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