El kit Thermo Scientific GlycoLink IP proporciona componentes para una inmunoprecipitación eficaz (IP y co-IP) basada en la inmovilización de anticuerpos y otras glicoproteínas a pequeña escala, covalente y de resina de afinidad a través de grupos de azúcar oxidados.
Características del kit GlycoLink IP:
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Inmovilización eficiente: empareja de 2 a 10 µg de anticuerpo oxidado u otra glicoproteína a 20 µl de resina en 2 horas o menos
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Inmovilización estable: la estructura de resonancia de los límites de la hidrazona son suficientemente estables para que el anticuerpo permanezca acoplado durante la elución
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Conserva la función de unión: inmoviliza IgG a través de la región Fc, de este modo, mantiene ambos sitios de unión de antígenos disponibles para capturar el elemento diana
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Aplicaciones versátiles: inmovilizan cualquier molécula que contenga azúcares oxidables, incluyendo las glicoproteínas para su uso en la purificación de la interacción de proteínas asociados
El kit GlycoLink utiliza la resina UltraLink activada por hidracida para inmovilizar y realizar 25 ensayos IP o de co-IP con diferentes anticuerpos o ligandos de glicoproteínas. El método es ideal para anticuerpos policlonales, que típicamente tienen abundantes carbohidratos (glicosilación) en sus porciones de Fc. Los anticuerpos monoclonales que contienen carbohidratos adecuados también son eficaces. Los anticuerpos inmovilizados por este método de hidrazida a carbohidratos tienen sitios de unión de antígenos sin obstrucciones y una capacidad de purificación óptima. Las columnas preparadas de glicoproteína o anticuerpo pueden regenerarse y reutilizarse al menos cinco veces para inmunoprecipitación, co-inmunoprecipitación o purificación por afinidad pull-down sin pérdida significativa de capacidad de unión.
Aplicaciones:• Inmunoprecipitación seguida por electroforesis y escisión de la proteína para espectrometría de masas o secuenciación
• Inmunoprecipitación y análisis SDS-PAGE de una proteína cuyo peso molecular sea similar al de anticuerpos de cadena ligera o pesada
• Identificación de los socios de unión de la glucoproteína inmovilizada
• La coinmunoprecipitación para determinar las interacciones proteína-proteína
Incluye:El kit contiene resina, tampones y reactivos para inmovilización; columnas de desalado; tampones de lisis/lavado IP y elución para inmunoprecipitación; columnas de centrifugación de microcentrífugas y tubos de recogida; y tampón de carga para SDS-PAGE
El método del kit GlycoLink IP resulta en la unión covalente de grupos de azúcar oxidados de un anticuerpo IP (o cualquier otra glicoproteína con grupos de carbohidratos oxidables) a la resina de hidracida. A continuación, la resina de anticuerpo se incuba con la muestra que contiene el antígeno de proteína de interés, permitiendo que se forme el complejo de anticuerpo:antígeno. Después del lavado para eliminar componentes no unidos de la muestra, el antígeno se recupera disociándolo del anticuerpo con el tampón de elución incluido en el kit. Todo el procedimiento se realiza en un vaso de giro de microcentrífuga, permitiendo que las soluciones se separen completamente de la resina de agarosa con una breve centrifugación. Con este procedimiento solo se eluye el antígeno, por lo que puede ser identificado y analizado después sin interferencias de fragmentos de anticuerpo.
Más datos del producto•
Inmovilización y conjugación mejoradas de glicoproteínasFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.