Los cartuchos de cromatografía de proteína G Thermo Scientific™ Pierce™ son dispositivos preenvasados prácticos y listos para su uso para el aislamiento y la purificación de anticuerpos policlonales y monoclonales de mamíferos a partir de suero, ascitis y sobrenadantes de cultivos celulares.

La proteína G agarosa Pierce es una proteína G recombinante inmovilizada covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). Esta particular variedad de resina de afinidad proporciona la combinación más versátil de funciones cromatográficas para aumentar el rendimiento y conseguir una purificación de alta pureza de la IgG completa procedente de muestras de suero de mamíferos. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

Características de la proteína G agarosa:

• Proteína G: la proteína G inmovilizada es idónea para la purificación de IgG policlonal a partir de suero de humano, de ratón, de vaca, de cabra y de oveja, incluido el isotipo IgG3 de humano y el IgG1 de ratón.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína G mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína G agarosa Pierce tiene una carga normal de proteína G inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión de entre 11 y 15 mg de IgG de humano por ml de resina.

Los cartuchos de cromatografía Pierce son compatibles con los principales sistemas automatizados de cromatografía líquida o para el procesamiento manual de jeringas, y se acoplan directamente a los sistemas ÄKTA™ o FPLC sin conectores adicionales. Gracias a los accesorios que se incluyen con cada producto, las columnas se pueden adaptar fácilmente para su uso con accesorios de jeringa Luer-Lok o tubos de 1/16”. Los cartuchos de proteína A proporcionan separaciones cromatográficas rápidas, sencillas y reproducibles, y se pueden regenerar para múltiples usos.

La proteína G es una proteína de la pared celular bacteriana de los estreptococos del grupo G y que ahora se produce como recombinante en E. coli. Como la proteína A, la proteína G se une a la mayoría de inmunoglobulinas humanas, principalmente a través de sus regiones Fc. La proteína G nativa posee dos lugares de unión con la inmunoglobulina y lugares de unión con la albúmina y la superficie celular. En la forma recombinante de la proteína G, estos lugares de unión con la superficie celular han sido eliminados para reducir las uniones inespecíficas cuando se purifican inmunoglobulinas. La proteína G recombinante tiene una masa de aproximadamente 21,6 kDa, pero su tamaño aparente según SDS-PAGE es de 31 a 34 kDa. La función de unión a IgG es óptima a un pH de 5; no obstante, también se produce una unión eficaz en condiciones casi neutras (pH de 7,0 a 7,2).

En comparación con la proteína A, la proteína G se una a una mayor variedad de subtipos de IgG procedentes de suero humano, de ratón y de rata. En particular, además de unirse a otros isotipos igual que la proteína A, la proteína G tiene una mayor capacidad de unión a la IgG3 humana, a la IgG1 de ratón y a los tres isotipos de IgG de rata. Por esta razón, la proteína G se recomienda generalmente para aplicaciones en las que participan estas especies e isotipos de anticuerpos. En lo que respecta a otras especies, la proteína G tiene una mayor capacidad de unión con la IgG de vacas, cabras y ovejas, pero presenta una menor capacidad de unión con la IgG de cerdos, cobayas, perros y gatos que la proteína A.

La proteína G agarosa Pierce se prepara utilizando el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Fisher AminoLink, que presenta muchas ventajas con respecto a los métodos tradicionales de inmovilización del ligando. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. El resultado es una resina de alta capacidad de unión que retiene la proteína funcional inmovilizada