Los columnas de centrifugación NAb de la proteína L Thermo Scientific son prácticas para la purificación rápida por afinidad a pequeña escala de anticuerpos de diversos tipos de muestras. Cada columna contiene 5 ml de la resina de proteína inmovilizada, lo que permite la purificación rápida de entre 5 y 65 mg de IgG a partir de entre 2 y 10 ml de suero u otra muestra. La cantidad real de IgG purificada varía en función del tipo de muestra y de la columna de centrifugación utilizada.

La proteína L agarosa Pierce es una proteína L recombinante inmovilizada covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). Esta variedad de resina en concreto proporciona la combinación más versátil de funciones cromatográficas para aumentar el rendimiento y conseguir una purificación de alta pureza de las inmunoglobulinas diana. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

Características de la proteína L agarosa Pierce:

• Proteína L: la proteína L inmovilizada es ideal para la purificación selectiva de anticuerpos humanos y de ratón que tienen cadenas ligeras kappa.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína L mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína L agarosa Pierce tiene una carga normal de proteína L inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión de entre 5 y 10 mg de IgG de humano por ml de resina.

Aplicaciones:
• Purifique anticuerpos monoclonales y policlonales que se unen débilmente a la proteína A o a la proteína G agarosa.
• Purifique anticuerpos monoclonales de sobrenadantes de cultivo suplementados con suero bovino.
• Lleve a cabo ensayos de inmunoprecipitación e inmunoprecipitación de proteína L.
• Purifique fragmentos de ScFv y Fab que contienen cadenas ligeras kappa.

La proteína L es una proteína de unión a inmunoglobulinas (36 kDa) que se origina en la bacteria Peptostreptococcus magnus, pero que ahora se produce de forma recombinante en E. coli. A diferencia de la proteína A y la proteína G, que se unen principalmente a través de regiones Fc (es decir, de cadena pesada) de las inmunoglobulinas, la proteína L se une a las Ig a través de las interacciones con las cadenas ligeras. Puesto que ninguna parte de la cadena pesada se ve implicada en la interacción de unión, la proteína L se une a una mayor variedad de clases de Ig que la proteína A o la G. La proteína L se une a representantes de todas las clases de Ig, incluidas IgG, IgM, IgA, IgE e IgD. Los fragmentos variables de una sola cadena (ScFv) y los fragmentos Fab también se unen a la proteína L.

A pesar de esta amplia capacidad de unión con respecto a clases de Ig, la proteína L no es una proteína de unión a inmunoglobulinas universal. La unión de la proteína L a inmunoglobulinas está restringida a aquellas que contienen cadenas ligeras kappa (es decir, cadenas kappa del dominio VL). En los humanos y los ratones, predominan las cadenas ligeras kappa. El resto de las inmunoglobulinas tienen cadenas lambda ligeras. Además, la proteína L solo es efectiva en la unión a determinados subtipos de cadenas ligeras kappa. Por ejemplo, se une a subtipos VkI, VkIII y VkIV humanos, pero no al subtipo VkII. La unión de inmunoglobulinas de ratón está restringida a aquellas que tienen cadenas ligeras VkI.

Debido a estos requisitos concretos para la unión eficaz, la principal aplicación para la proteína L inmovilizada es la purificación de anticuerpos monoclonales de ascitis o sobrenadante de cultivo que se sabe que tienen la cadena ligera kappa. La proteína L resulta extremadamente útil para la purificación de anticuerpos monoclonales que contienen VLk de los sobrenadantes de cultivo porque no se une a inmunoglobulinas bovinas, que están presentes en el suplemento de suero del medio. Además, la proteína L no interfiere en el punto de unión a antígenos del anticuerpo, con lo que resulta útil para ensayos de inmunoprecipitación, incluso los que utilizan IgM.

La proteína L agarosa Pierce se los que utilizan con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización del ligando. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. El resultado es una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína L inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

La proteína L agarosa Pierce es una resina de afinidad versátil para la purificación de isotipos IgG de mamíferos que contienen cadenas ligeras kappa específicas. La proteína L es especialmente adecuada para aislar anticuerpos monoclonales VkI de IgG de ratón, así como VkI, VkIII y VkIV de IgG de humano.

Propiedades de la agarosa en gránulos entrecruzada al 6 % (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: La presión manométrica indicada de un aparato de cromatografía líquida puede hacer referencia a la medición de la presión total del sistema en lugar de a la caída de presión en la columna).

Más datos del producto
• Uso de proteínas de unión de anticuerpos para la purificación de anticuerpos

Productos relacionados
Proteína L-agarosa Pierce™
Cartuchos de cromatografía de proteína L Pierce™, 5 ml