Los kits de centrifugación NAb™ de proteína A Plus Thermo Scientific™ son prácticos para la purificación rápida por afinidad a pequeña escala de anticuerpos de diversos tipos de muestras. Cada columna de centrifugación microcentrífuga precargada de resina de proteína inmovilizada permite la purificación rápida de ≥34 mg de IgG de humano a partir de 0,5-2 ml de suero u otra muestra. Con cada kit se incluyen tampones y un protocolo optimizado para la purificación de, al menos, dos muestras de anticuerpos.

La proteína A Plus agarosa Pierce es una resina de afinidad versátil y de alto rendimiento para la purificación de anticuerpos. Es una proteína A nativa purificada inmovilizada covalentemente a alta densidad en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). De entre las distintas variedades disponibles de proteína A inmovilizada en resinas de afinidad, esta proporciona la combinación más versátil de características cromatográficas para una alta producción y una óptima purificación de todas las IgG procedentes de muestras de suero de mamíferos. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

Características de la Proteína A Plus agarosa Pierce:

• Proteína A nativa: la proteína A inmovilizada es idónea para la purificación de la IgG policlonal a partir de suero humano, de conejo, de cerdo, de perro o de gato.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína A mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Alta capacidad: la variedad «Plus» de la proteína A agarosa Pierce tiene una carga densa de proteína A inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión superior a 34 mg de IgG de humano por ml de resina (aproximadamente entre 16 y 17 mg de IgG de ratón por ml de resina).

La proteína A es un componente de la pared celular producido por varias cepas de Staphylococcus aureus. La proteína de 46,7 kDa consta de una única cadena polipeptídica que no contiene hidratos de carbono. La proteína A nativa tiene cuatro puntos de unión de gran afinidad (Ka = 10^8/mol) capaces de interactuar con la región Fc de los anticuerpos de la clase IgG de determinadas especies de mamíferos. La función de unión a IgG es óptima a un pH de 8,2; no obstante, también se produce una unión eficaz en tampones neutros y fisiológicos (pH de 7,0 a 7,6).

La proteína A es una proteína derivada de una bacteria que se une con alta afinidad y especificidad a la porción Fc de los anticuerpos, especialmente a los de la clase IgG. En comparación con la proteína G (la alternativa a la proteína A), la proteína A tiene la mayor capacidad de unión a las subclases de IgG de conejos, cerdos, perros y gatos. La proteína A tiene también una mayor capacidad de unión con la IgG humana, con la excepción de IgG3, con la que se une de forma débil. La proteína A se une débilmente a la IgG1 de ratón y no se recomienda para la mayoría de aplicaciones con ese isotipo de anticuerpo.

La proteína A Plus agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización de ligandos. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína A inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

Propiedades de la agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: la presión manométrica indicada de un aparato de cromatografía líquida puede estar midiendo la presión total del sistema en lugar de la caída de presión en la columna).

Más datos del producto
• Uso de proteínas de unión de anticuerpos para la purificación de anticuerpos

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