Los aminoácidos Thermo Scientific™ NeuCode™ aumentan el nivel de multiplexing que se puede conseguir en el etiquetado metabólico de proteínas para el análisis de espectrometría de masas. La lisina-080 NeuCode™ (3,3,4,4,5,5,6,6-D8 L-lisina-2HCl) también se puede utilizar con el SILAC tradicional para mejorar la flexibilidad de las opciones de multiplexing o para reducir la complejidad del análisis.
Características generales del etiquetado con SILAC NeuCode:
• Etiquetado eficaz: incorporación del 100 % de las etiquetas en proteínas de células vivas sin toxicidad
• Compatible: puede ser multiplexado con aminoácidos SILAC existentes
• Ahorra tiempo: no es necesario el etiquetado para la incorporación al 100 % si solo se utilizan aminoácidos pesados
• Suplementos de alta calidad: aminoácidos pesados con > 98 % de pureza isotópica
El etiquetado estable de isótopos con aminoácidos en el cultivo celular (SILAC) es un método potente para identificar y cuantificar los cambios diferenciales relativos en muestras de proteínas complejas. El etiquetado metabólico de NeuCode es similar al de SILAC, pero difiere en que este etiquetado solo utiliza aminoácidos pesados. El aumento de la capacidad de multiplexado de los aminoácidos NeuCode es posible mediante el uso de defectos de masas de neutrones adicionales en los isótopos estables. Estas pequeñas diferencias de masa pueden resolverse en espectrómetros de masas de alta resolución (espectrómetros de masas Thermo Scientific™ Orbitrap™ Elite™, Q Exactive™, Orbitrap™ Fusion™ Tribrid™ y Orbitrap™ Fusion™ Lumos™ Tribrid™). El uso único de aminoácidos pesados elimina la necesidad de incorporar el 100 % de aminoácidos usados para SILAC (tanto pesados como ligeros), y puede ser especialmente útil para estudios con células primarias.
Los aminoácidos NeuCode se utilizan junto con medios de cultivo celular especializados deficientes en aminoácidos esenciales. La L-lisina pesada se utiliza para el análisis SILAC de péptidos que se han digerido con tripsina o LysC. La lisina-080 NeuCode se puede usar con 4,4,5,5-D
4 L-lisina o
13C
6 15N
2 L-lisina para experimentos dúplex y puede combinarse con lisina ligera para experimentos de tríplex.
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