El panel Multiplex de vía AKT Thermo Scientific SureQuant (cuantificación relativa) proporciona una solución de cuantificación completa para el enriquecimiento y análisis de proteínas clave de la vía de señalización AKT mediante espectrometría de masas (MS).

El panel Multiplex de vía AKT SureQuant (cuantificación relativa) consta de dos módulos:
• El módulo de preparación de muestras de vía AKT SureQuant IP y MS incluye todos los reactivos necesarios para el inmunoenriquecimiento de las proteínas de la vía AKT-mTOR y la preparación de muestras MS en solución, desde muestras de lisis hasta la limpieza de péptidos
• El módulo de cuantificación relativa de vía AKT SureQuant incluye un estándar de idoneidad del sistema para monitorizar el rendimiento de MS, la mezcla AQUA Ultimate HeavyPeptide para la cuantificación relativa de péptidos, y métodos para el uso de instrumentos Thermo Scientific Q Exactive y Fusion Tribrid e instrumentación Nanospray LC

Las características del panel Multiplex de vía AKT SureQuant incluyen:
• Completo: contiene todos los reactivos para supervisar con éxito el rendimiento del sistema MS, la preparación de las muestras y la cuantificación absoluta de las proteínas y los péptidos diana
• Validado: los anticuerpos, péptidos y lisados de control han pasado por pruebas rigurosas para determinar el grado de especificidad y cuantificación basada en MS correcta de cada péptido diana
• Multiplex: capaz de cuantificar diez proteínas clave en la vía de señalización AKT
• Flexible: el formato modular permite únicamente el inmunoenriquecimiento, o en combinación con cuantificación relativa o absoluta

La vía de señalización AKT sirve como guía maestra reguladora para el crecimiento y la proliferación celular. La activación aberrante de esta vía promueve la supervivencia de las células tumorales en muchos tipos de cáncer. Este kit multiplex es ideal para supervisar la expresión de proteínas de 10 proteínas clave en la vía de señalización AKT (AKT, PTEN, IRS1, IGF1-R, GSK3a, GSK3b, PRAS40, mTOR, p70S6K y TSC2) en un solo ensayo. La capacidad de supervisar y cuantificar simultáneamente estas dianas en una sola muestra la convierte en una potente herramienta de evaluación de la actividad normal y anormal de la vía.

El módulo de preparación de muestras de la vía AKT SureQuant IP y MS permite una inmunoprecipitación (IP) y una coinmunoprecipitación (co-IP) de antígenos altamente eficaces para el análisis de MS. Primero, las células se lisan y se incuban con una mezcla de anticuerpos biotinilados verificada por IP-MS. El complejo anticuerpo-antígeno se captura en gránulos magnéticos de estreptavidina compatibles con MS con proteínas no específicas eliminadas mediante el lavado con tampones compatibles con MS. Las proteínas diana se eluyen mediante tripsina y son directamente compatibles con la preparación de muestras de MS. La preparación de la muestra de MS se ha agilizado y se puede completar en ∼4 horas para el análisis de MS en el mismo día.

El módulo de cuantificación relativa de la vía AKT SureQuant proporciona reactivos para la cuantificación relativa de 30 péptidos únicos a partir de 10 proteínas diana de la vía de señalización AKT-mTOR mediante cromatografía líquida (LC) y MS. La mezcla AQUA Ultimate HeavyPeptide se proporciona para su uso como patrón interno añadido para la cuantificación relativa en la muestra multiplexada. Se proporcionan métodos estandarizados y plantillas de proceso de datos para agilizar la adquisición y el análisis de datos.

En este módulo se incluye el estándar de idoneidad del sistema de LC-MS/MS Pierce (mezcla de 7 x 5) para evaluar el rango dinámico de los sistemas de LC-MS/MS antes de ejecutar las curvas de calibración y las muestras.

Juntos, estos módulos proporcionan una solución completa para la preparación de muestras y el análisis de las proteínas diana en la vía.

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