El módulo de preparación de muestras de vía AKT (fosfo) Thermo Scientific SureQuant IP y MS proporciona una solución de reactivos completa, que sirve para el enriquecimiento multiplexado y la preparación para estudios de eventos de fosforilación clave de la vía de señalización AKT mediante la espectrometría de masas (MS).

Las características del módulo de preparación de muestras de vía AKT (fosfo) SureQuant IP y MS incluyen:
• Completo: incluye todos los reactivos necesarios para la lisis de muestras, el enriquecimiento inmunológico y la preparación de muestras de MS
• Validado: anticuerpos validados para especificidad y antecedentes
• Optimizado: procedimiento simplificado y condensado para preparar las muestras tras la inmunoprecipitación en cuatro horas
• Multiplex: capaz de inmunoenriquecer AKT, PTEN, IRS1, IGF1-R, GSK3a, GSK3b, PRAS40, mTOR, p70S6K, y TSC2 fosforiladas en una sola reacción

La vía de señalización AKT sirve como vía reguladora maestra para el crecimiento y proliferación celular, y la fosforilación juega un papel clave en su modulación. La activación aberrante de esta vía promueve la supervivencia de las células tumorales en muchos tipos de cáncer. Este módulo es ideal para el inmunoenriquecimiento multiplexado de proteínas fosforiladas clave en la vía de señalización AKT y se ha optimizado para su uso con los módulos de cuantificación SureQuant.

El módulo de preparación de muestras de vía AKT SureQuant (fosfo) IP y MS permite una inmunoprecipitación (IP) y coinmunoprecipitación (co-IP) de antígenos altamente eficaces para el análisis de MS. Primero, las células se lisan y se incuban con una mezcla de anticuerpos biotinilados verificada por IP-MS. El complejo anticuerpo-antígeno se captura en gránulos magnéticos de estreptavidina compatibles con MS con proteínas no específicas eliminadas mediante el lavado con tampones compatibles con MS. Las proteínas diana se eluyen mediante tripsina y son directamente compatibles con la preparación de muestras de MS. La preparación de la muestra de MS se ha agilizado y se puede completar en ∼4 horas para el análisis de MS en el mismo día.

Este kit se puede utilizar con el módulo de cuantificación absoluta de vía AKT (fosfo) SureQuant o el módulo de cuantificación relativa de vía AKT (fosfo) SureQuant para la cuantificación dirigida de proteínas. Cuando se utilizan juntos, estos módulos proporcionan una solución completa para la preparación de muestras y el análisis de las proteínas fosforiladas diana en la vía.

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