Ensayo de células T CD8+ PureQuant™

Los ensayos Applied Biosystems PureQuant son una familia de ensayos que identifican y cuantifican con precisión tipos específicos de células inmunitarias en una población celular mixta. Estos ensayos se basan en TaqMan y qPCR y miden la metilación del ADN genómico en sitios específicos que sirven como identificador único. Los ensayos incluyen estándares y controles y cada placa de 96 pocillos puede alojar hasta siete muestras de ensayo. Los resultados se proporcionan como un porcentaje del tipo de celda seleccionada de las celdas de entrada totales mediante una herramienta de análisis libre.

El ensayo de células T CD8+ PureQuant utiliza el gen CD8B como marcador epigenético para las células T CD8+; el ensayo está enfocado a los elementos reguladores dentro de su tercer intrón (consulte http://stm.sciencemag.org/content/10/452/eaan3508).

Entre las ventajas se incluyen:
• Rendimiento comprobado: la tecnología principal se ha utilizado para la identificación y cuantificación de los tipos de células inmunitarias durante más de una década
• Fácilmente estandarizado: el método qPCR permite obtener resultados uniformes en varios usuarios, instrumentos y centros
• Facilita la presentación de trámites normativos: las especificaciones técnicas se establecieron siguiendo las directrices ICHQ2(R1)
• Programación flexible: el ensayo se puede realizar usando células o ADNg frescas o congeladas

Los ensayos incluyen todos los reactivos, estándares y controles necesarios para realizar el ensayo. Los componentes específicos son los siguientes:
• Calibrador: corrige la variación en la eficiencia de conversión de bisulfito. El calibrador a base de plásmidos alberga las regiones genómicas elegidas en proporciones equinolares e incluye GAPDH. Sometido a conversión de bisulfito seguido por la estimación del número de copias mediante la curva estándar qPCR. Permite la estimación del factor de eficiencia de bisulfito específico del ensayo: la proporción entre el número de copias de TPG/GAPDH medidos desde el mismo plásmido.
• Referencia: comprueba el rendimiento del ensayo. Consiste en ADN genómico extraído de sangre la humana de donantes sanos combinados. Los valores de referencia representan el rango esperado del tipo de celda elegida. Por ejemplo, las células CD8+ son generalmente más abundantes que las células Treg o Th17.
• Estándares: determina el número de copias desconocido. Consta de seis diluciones que abarcan un rango dinámico lineal de 4 log (30-31250 copias). Los números de copia absolutos se pueden determinar de forma fiable mediante la pendiente y la intersección de las respectivas curvas estándar.

Este producto se fabrica en una planta con un sistema de control de calidad certificado ISO9001.