Inhibidor de la ARNasa de Ambion™, clonado, 40 U/μl

El inhibidor de la RNasa Ambion™, una proteína humana recombinante producida en E. coli, es un potente inhibidor de las enzimas neutras de RNasa pancreática de tipo A. El modo de inhibición es no competitivo; el inhibidor une fuertemente las RNasas en una proporción 1:1. Se suministra en un tubo que contiene 10 000 U (40 U/µl). Se ha demostrado que la enzima inactiva los ARNasas presentes en muchos tejidos y tipos celulares. Se ha demostrado que la adición del inhibidor de ribonucleasa (IR) es útil cuando se debe mantener la integridad del ARN, como en la preparación del ADNc mediante transcripción inversa, la transcripción de ARN in vitro y la síntesis de proteínas in vitro. El inhibidor de ribonucleasa (IR) no inhibe la RNasa I, T1, T2, H, U1, U2 o CL3. El inhibidor de ribonucleasa (IR) requiere un mínimo de 1 mM de DTT para mantener la actividad, y tiene un intervalo de actividad entre pH 5,0 y 8,0 con una actividad máxima entre pH 7,0 y 8,0. Dado que el modo de inhibición es la formación de un complejo 1:1 con RNasas, se debe tener cuidado para evitar la desnaturalización u oxidación del inhibidor de la ribonucleasa (por ejemplo, mediante la adición de SDS, urea, etc.). Se debe añadir IR a las reacciones de transcripción, traslación y síntesis de ADNc para dar una concentración final de 1 U/µl. El inhibidor de la RNasa se somete a rigurosas pruebas para detectar la contaminación de la RNasa, exonucleasa, endonucleasa y la actividad de la proteasa.

Definición de la unidad:
Una unidad es la cantidad de proteína necesaria para inhibir la actividad de 5 ng de RNasa A en un 50 %. Condiciones del ensayo de la unidad: 100 mM de tris-acetato (pH 6,5), 1 mM de EDTA y 1 mM de 2', 3'-CMP cíclico e inhibidor de RNasa. La adición de ARNasa A inicia la reacción. La actividad del inhibidor de RNasa se mide por la inhibición de la hidrólisis del 2', 3'-CMP cíclico por la RNasa A.