Este paquete incluye la ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II (4 x 500 U) y la mezcla de dNTP de alta calidad (10 mm cada uno, 2 x 1 ml).

ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II
Las ADN polimerasas de alta fidelidad Thermo Scientific Phusion establecen un alto estándar para PCR de alto rendimiento. Con una tasa de errores 52 veces menor que la de Taq y 6 veces inferior a la de Pfu, las ADN polimerasas son una opción excelente para la clonación y otras aplicaciones que requieren alta fidelidad. Ofrecen un rendimiento sólido con tiempos de protocolo cortos, incluso en presencia de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Además, generan una mayor producción con menos cantidad de enzimas que otras polimerasas de ADN.

• Alta fidelidad (52X Taq)
• Sin amplificación no específica ni degradación de cebador durante la preparación de la reacción
• PCR rápida gracias a los breves tiempos de extensión (de 15 a 30 s/kb)
• Mayor producción con cantidades mínimas de enzimas

Mediante el uso de ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II, la amplificación prosigue sin la producción de productos inespecíficos debido a la combinación de ADN polimerasa Phusion y un ligando Affibody específico unido reversiblemente que inhibe la actividad de ADN polimerasa a temperatura ambiente. El ligando Affibody también inhibe la actividad de exonucleasa 3´5´ de la polimerasa, lo que evita la degradación de los cebadores y del ADN del molde durante la preparación de la reacción. A temperaturas que potencian la actividad de la polimerasa, se libera el ligando, lo que activa completamente la polimerasa. La ADN polimerasa Phusion Hot Start II de alta fidelidad se reactiva inmediatamente a altas temperaturas, por lo que no requiere un paso de activación independiente en los protocolos de PCR.

Uso de ADN polimerasa Phusion
Las reglas de recocido para la ADN polimerasa Phusion son diferentes a las de muchas ADN polimerasas comunes (como las ADN polimerasas Taq). Para obtener unos resultados óptimos, utilice nuestra calculadora Tm en www.thermofisher.com/tmcalculator.

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La mezcla de dNTP Thermo Scientific contiene soluciones acuosas premezcladas de dATP, dCTP, dGTP y dTTP, cada una con una concentración final de 10 mm. Los nucleótidos tienen más del 99 % de pureza, no contienen actividades de nucleasa, ni ADN humano ni de E. coli. Las mezclas ofrecen la posibilidad de reducir el número de pasos de pipeteo y el riesgo de errores de preparación de reacción.

• Pureza superior al 99 % confirmada por HPLC
• Libre de ADN humano y de E. coli
• Estable después de varios ciclos de congelación y descongelación
• Hasta el 95 % de los dNTP permanecen en forma de trifosfato después de siete semanas a temperatura ambiente
• Hasta el 90 % de los dNTP permanecen en forma de trifosfato después de 30 ciclos de PCR (1 minuto a 94°C; 3 minutos a 72°C)

Para su uso en todas las aplicaciones de biología molecular, incluyendo PCR, PCR en tiempo real, PCR de alta fidelidad y larga, LAMP-PCR, síntesis de ADNc, RT-PCR, RDA, MDA, etiquetado de ADN y secuenciación de ADN.

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