El kit de etiquetado de ADN Thermo Scientific DecaLabel es un sistema completo para la síntesis rápida de sondas de ADN marcadas radioactivamente de actividad altamente específica. Se basa en el método mejorado de cebado aleatorio desarrollado por Feinberg y Vogelstein.

La principal mejora frente a los kits tradicionales de primers aleatorios implica el uso de decamadores aleatorios en lugar de hexámeros para asegurar un recocido más eficiente con ADN a 37 °C. Además, Klenow Fragment, exo- ha sido genéticamente diseñado para eliminar la actividad de las exonucleasas. La enzima mejorada no degrada la sonda marcada durante la reacción y permite un marcado de elevado rendimiento, incluso con bajas cantidades de plantillas. Se pueden marcar de forma uniforme fragmentos de ADN de cualquier longitud. Se proporcionan dos mezclas de etiquetado para un uso más flexible de dATP o dCTP radiomarcados.

Aspectos destacados

• Alta radiactividad específica de las sondas: superior a 1 x 10⁹ dpm/µg ADN
• Rápido: 5 minutos a 37 °C
• Alto rendimiento: con fragmento Klenow, exo una sonda etiquetada no se degrada durante la reacción
• Flexible: adecuado para dATP o dCTP radiomarcado

Aplicaciones

• Generación de sondas de ADN radiomarcado para su uso en una variedad de experimentos de hibridación: Northern y Southern blots, hibridaciones de colonias/placas, dot/slot blots e hibridaciones in situ.

Incluye

• Fragmento Klenow, exo-
• Decanucleotides en tampón de reacción
• Mezcla A (-dATP)
• Mezcla C (-dCTP)
• Mezcla dNTP
• Plantilla de control
• Agua sin nucleasas
• Protocolo detallado

Principio
Los decamores aleatorios se recuecen al ADN molde desnaturalizado y los dNTP radiomarcados son entonces incorporados en nuevas hebras de ADN con el fragmento Klenow, exo- (consulte la figura 1 en Datos complementarios).