Kit TOPO™ TA Cloning™ para subclonación, con células E. coli químicamente competentes One Shot™ TOP10

Los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación proporcionan una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y de un solo paso («clonación TOPO™») para la inserción directa de productos de la polimerasa (PCR) amplificados con polimerasa Taq en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™ 4-TOPO™ TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven menos secuencia de vector y más secuencia de inserto en cada reacción, y están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija. Características de los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación:

• Obtenga más secuencia—permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar.
• Rápido y sencillo—de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación.
• Eficiente—obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado.
• Demostrado—rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas

Descripción general de los kits TOPO™ TA Cloning™—para secuenciación

Vector: vector pCR™4-TOPO™ TA—vector de clonación optimizado para obtener mejores resultados de secuenciación

Método de clonación: TOPO™ TA Cloning™: ligación en 5 minutos con base de Topoisomerasa I de productos PCR con salientes 3´A (amplificados con Taq) al vector

Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga o competentes de rápido crecimiento, o los suyos propios.

Vector pCR™4-TOPO™ TA: optimizado para secuenciación
Hemos eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR™4-TOPO™ TA para acortar la distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4-TOPO™ TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.

Manipulación y selección de clones de pCR™4-TOPO™ TA
El vector TA pCR™4-TOPO™ TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y detección azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli proporcionadas.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4-TOPO™ TA utilizado en este kit se suministra con salientes 3´T para una ligación eficaz de los productos PCR amplificados con Taq, que contienen salientes 3´A.

El estándar en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación: opciones de kits
El kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:

• Clonación general: TOP10 (n.º de K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonación de gran eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4580-01, K4580-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K4595-01, K4595-40)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K4530-20)
• Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de de cat. 450030)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de de cat. K4575-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.

Enlaces relacionados

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• Guía de selección de kits de purificación de ADN plasmídico
• Reactivos, instrumentos y suministros de PCR