Kit TOPO™ TA Cloning™ para subclonación, con células E. coli químicamente competentes One Shot™ TOP10
Kit TOPO&trade; TA Cloning&trade; para subclonación, con células <i>E. coli</i> químicamente competentes One Shot&trade; TOP10
Invitrogen™

Kit TOPO™ TA Cloning™ para subclonación, con células E. coli químicamente competentes One Shot™ TOP10

Los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación proporcionan una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y deMás información
Have Questions?
Cambiar vistabuttonViewtableView
Número de catálogoCantidad
K4575J1010 reacciones
K45750125 reacciones
K45754050 reacciones
K4575J10SC
también denominado K4575-J10SC
10 reacciones
Número de catálogo K4575J10
Precio (USD)
-
Cantidad:
10 reacciones
Los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación proporcionan una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y de un solo paso («clonación TOPO™») para la inserción directa de productos de la polimerasa (PCR) amplificados con polimerasa Taq en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™ 4-TOPO™ TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven menos secuencia de vector y más secuencia de inserto en cada reacción, y están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija. Características de los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación:

Obtenga más secuencia—permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar.
Rápido y sencillo—de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación.
Eficiente—obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado.
Demostrado—rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas

Descripción general de los kits TOPO™ TA Cloning™—para secuenciación

Vector: vector pCR™4-TOPO™ TA—vector de clonación optimizado para obtener mejores resultados de secuenciación

Método de clonación: TOPO™ TA Cloning™: ligación en 5 minutos con base de Topoisomerasa I de productos PCR con salientes 3´A (amplificados con Taq) al vector

Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga o competentes de rápido crecimiento, o los suyos propios.

Vector pCR™4-TOPO™ TA: optimizado para secuenciación
Hemos eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR™4-TOPO™ TA para acortar la distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4-TOPO™ TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.

Manipulación y selección de clones de pCR™4-TOPO™ TA
El vector TA pCR™4-TOPO™ TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y detección azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli proporcionadas.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4-TOPO™ TA utilizado en este kit se suministra con salientes 3´T para una ligación eficaz de los productos PCR amplificados con Taq, que contienen salientes 3´A.

El estándar en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación: opciones de kits
El kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:

• Clonación general: TOP10 (n.º de K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonación de gran eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4580-01, K4580-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K4595-01, K4595-40)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K4530-20)
• Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de de cat. 450030)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de de cat. K4575-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.

Enlaces relacionados

Servicios de clonación y construcción de vectores personalizados
Guía de selección de kits de purificación de ADN plasmídico
Reactivos, instrumentos y suministros de PCR
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraTOP10
Tipo de célulaQuímicamente competente
Método de clonaciónTOPO™-TA
Para utilizar con (aplicación)Biología de la cromatina
Línea de productosOne Shot™
Tipo de productoKit de clonación
Cantidad10 reacciones
VectorVectores TOPO-TA Cloning
FormatoKit
PromotorT7, T3
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Cada kit de TOPO™ Cloning para secuenciación contiene vector pCR™4-TOPO™ o pCR™ 4Blunt-TOPO™, solución salina, dNTP, plantilla de control y primers, primers directos T3, T7, M13 (-20) e inversos M13, E. coli químicamente competente One Shot™ o Electrocomp™, medio S.O.C. y un plásmido de control de pUC19. Almacenar la E. coli One Shot™ a -80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

Compartir número de catálogo, nombre o enlace.