La adición de solución de interrupción de ácido sulfúrico cambia el color a amarillo, lo que permite una medición exacta de la intensidad a 450 nm mediante un espectrofotómetro o un lector de placas. Esta formulación particular se utiliza en la mayoría de los kits ELISA Thermo Scientific Pierce, donde se proporciona un rendimiento uniforme para la técnica ELISA de tipo sándwich.

Características de la solución de sustrato de TMB:

• Número de producto: N301
• Tamaño: 100 ml (suficiente para unas 10 microplacas de 96 pocillos)
• Almacenamiento: se envía en paquetes fríos. Tras la recepción, almacenar inmediatamente a entre 2 y 8 °C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad indicada.
• Aplicación: ELISA: Recomendado para inmunoensayos enzimáticos basados en peroxidasa. Tras la oxidación, el TMB forma un producto de reacción azul soluble en agua que puede medirse espectrofotométricamente a 605 nm. Cuando ocurre la acidificación, el producto de reacción se vuelve amarillo y tiene un pico de absorbancia a 450 nm.
• Precauciones: Este producto es sensible a la contaminación de una variedad de agentes oxidantes. Para que el producto no entre en contacto con la contaminación y caduque de forma prematura, evite el contacto de la solución de TMB con cualquier fuente potencial de contaminación. Nunca pipetee directamente desde el frasco. Vierta la cantidad necesaria en un tubo y pipetee desde el tubo. No vuelva a introducir el exceso de TMB al recipiente de almacenamiento principal.

Procedimiento:
• Añada 100 µl de sustrato de TMB a cada pocillo que contenga la reacción de peroxidasa.
• Incube a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos.
• Añada 100 µl de solución de interrupción (ácido sulfúrico 0,16 M, N600) a cada pocillo.
• Mida la absorbancia a 450 nm.