E. coli DNA Ligase

La ligasa de ADN E coli cataliza la formación de enlaces fosfodiéster en presencia de β-NAD entre ADN bicatenario con extremos 3´-hidroxilo y 5´-fosfato cohesivo. Los ácidos nucleicos de una sola cadena no son sustratos para esta enzima.

Aplicaciones: Síntesis de la segunda cadena del ADNc (1). Ligasa de ADN T4 alternativa cuando no se requiere ligadura de extremo romo (2).

Fuente: Purificado a partir de E. coli 594 (su^-) con λ lisógeno gt4lop-11 lig⁺ S7 (3).

Pruebas de rendimiento y calidad: Endodesoxirribonucleasa y ensayos de exodesoxirribonucleasa 3´ y 5´; ligadura de eficacia probada.

Definición de la unidad: Una unidad es la cantidad de enzima necesaria para administrar una ligadura al 50 % del ADN λ digerido de Hind III en 30 min. a 16 °C en un volumen final de 20 μl que contiene una concentración de extremo 5´ de 0,12´m (300 μg/ml)

Condiciones de reacción de la unidad: 18,8 mm de Tris-HCl (pH 8,3), 90,6 mm de KCl, 4,6 mm de MgCl₂ , 3,8 mm de DTT, 0,15 mm de λ-NAD, 10 mm de (NH₄ )₂ SO₄ en 20 μl durante 1 h a 16 °C.