El kit de biotinilación Sulfo NHS-SS Thermo Scientific EZ-Link contiene suficientes reactivos para diez reacciones de biotinilación (por ejemplo, 1–10 mg de anticuerpos por reacción). La sulfo-NHS-SS-biotina EZ-Link incluida en el kit es un reactivo de biotinilización soluble en agua de ésteres de N-hidroxisucinimida (NHS) cuyo brazo del separador incluye un enlace disulfuro divisible para el etiquetado reversible de proteínas y aminas primarias de la superficie celular.

Características de la Sulfo-NHS-SS-biotina EZ-Link:

• Etiquetado de proteínas: biotinile anticuerpos para facilitar la inmovilización, purificación o detección
• Etiquetado de la superficie celular: biotiniliza solo las proteínas de superficie de células completas porque el reactivo cargado negativamente no permea las membranas celulares
• Aminorreactivo: reacciona con aminas primarias (-NH2), como las cadenas laterales de lisina o el extremo amino de los polipéptidos
• Escindible: el enlace de disulfuro del agente separador permite eliminar la etiqueta de biotina utilizando agentes reductores como DTT; solo un pequeño grupo sulfhidrilo permanece unido a la molécula
• Soluble: el grupo sulfo-NHS cargado aumenta la solubilidad en agua del reactivo en comparación con los compuestos normales de éster NHS
• Longitud media: el agente espaciador de longitud media (longitud total añadida al objetivo) mide 24,3 angstroms; consiste en el grupo de ácido valérico de la biotina nativa extendido por una cadena de 7 átomos

La sulfo-NHS-SS-biotina es un aminorreactivo de biotinilación que contiene un agente separador extendido para reducir los obstáculos estéricos asociados con la unión de la avidina. Este reactivo es soluble en agua, por lo que permite que la biotinilización se realice en ausencia de disolventes orgánicos como el dimetilsulfóxido (DMSO) o la dimetilformamida (DMF) para aplicaciones que no toleran disolventes o que se complican debido a su inclusión. El compuesto es particularmente útil para etiquetar y purificar proteínas de la superficie celular, ya que (a) su grupo sulfonato impide que atraviese las membranas celulares y (b) su brazo del separador divisible permite que las proteínas inicialmente biotiniladas se liberen de las columnas de afinidad con la estreptavidina.

Elaboramos reactivos de biotina para garantizar los niveles más altos posibles de integridad, uniformidad y rendimiento del producto para aplicaciones de investigación específicas.

Los ésteres de N-hidroxisulfosuccinimida (NHS) de biotina son el tipo más popular de reactivo de biotinilación. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficazmente con grupos amino primarios (-NH2) en tampones alcalinos para formar enlaces amida estables. Las proteínas (como los anticuerpos) suelen tener varias aminas primarias que están disponibles como objetivos de etiquetado, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo N de cada polipéptido.

Las variedades de reactivos de éster de NHS de biotina difieren en longitud, solubilidad, permeabilidad celular y capacidad de escisión. Las biotinas de NHS no sulfonadas permean las células, pero deben disolverse en disolvente orgánico, como DMSO o DMF. Las biotinas de sulfo-NHS (y aquellas con separadores pegilados) son solubles en agua directamente, pero no permean las membranas. Las variedades que contienen enlaces disulfuro se pueden escindir usando agentes reductores, permitiendo que el grupo de biotina se desconecte de la proteína etiquetada.

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