El kit de inmovilización CarboxyLink Thermo Scientific se utiliza para la inmovilización covalente de péptidos u otras moléculas que contienen carboxilo (—COOH) en una resina porosa y con gránulos para su uso en procedimientos de purificación por afinidad.

La resina CarboxyLink es agarosa granulada entrecruzada que se ha activado con diamina-dipropilamina (DADPA) para contener brazos espaciadores largos, cada uno con una amina primaria al final. Cuando se incuban con la resina y el entrecruzador carbodiimida EDC (incluido en el kit de inmovilización CarboxyLink), las moléculas con contenido de carboxilo se conectan permanentemente al soporte por medio de uniones de amida estables. Una vez acoplada la molécula, la columna de afinidad preparada se puede utilizar varias veces en procedimientos de purificación por afinidad de proteínas típicos. Las resinas de acoplamiento CarboxyLink también se pueden utilizar para inmovilizar otros tipos de moléculas utilizando químicos alternativos entrecruzados reactivos con aminas.

Características del kit de inmovilización CarboxyLink:

• Resina de acoplamiento CarboxyLink: activado con DADPA de agarosa granulada al 4% entrecruzada
• Inmovilización eficaz: se puede acoplar a 1 o 2 mg de péptidos por mililitro de resina (resina de agarosa CarboxyLink activada con más de 16 µmol de amina por mililitro de resina; DADPA en soporte UltraLink activado con más de 40 µmol de amina por mililitro de resina)
• Vinculación estable: la inmovilización da como resultado una unión covalente de grupos carboxilo por enlaces de amida, permitiendo múltiples rondas de purificación por afinidad con un lote de resina preparada
• Condiciones de acoplamiento flexible y suave: reacción de inmovilización completada en simple MES u otro tampón sin amina ni carboxilo, casi neutro, con o sin disolvente orgánico.
• Ideal para péptidos sin modificar: inmoviliza péptidos con alta capacidad y diversas orientaciones sin obstáculos estéricos, lo que permite un uso eficaz en la purificación por afinidad de anticuerpos específicos
• Kits y tamaños de producto prácticos: puede elegir kits de cinco columnas con conjuntos completos de tampones, entrecruzadores y columnas versátiles de centrifugación / goteo que contengan cualquier tipo de resina (agarosa o poliacrilamida) o elegir resina independiente para otros usos

Dado que el EDC entrecruza carboxilatos a aminas primarias, péptidos y otras moléculas que contienen ambos de estos grupos funcionales, se polimerizarán e inmovilizarán de forma diversa en la resina CarboxyLink. Para los péptidos cuyos únicos grupos carboxilo y amino están en el terminal, el acoplamiento con el kit CarboxyLink da como resultado cadenas de péptidos de extremo a extremo que están vinculadas por sus extremos de C-terminal al soporte. En general, esta estructura proporciona una alta capacidad y un bajo obstáculo estérico para su uso en la purificación por afinidad. Sin embargo, en el caso de los péptidos que contienen múltiples aminas primarias (lisina) o carboxilatos (ácido glutámico y aspártico) en el medio de su secuencia, el método de acoplamiento CarboxyLink puede provocar el bloqueo de los sitios de unión clave, lo que da como resultado una alta capacidad de acoplamiento pero una capacidad de unión deficiente para la purificación por afinidad. Los métodos alternativos para la inmovilización incluyen resina de acoplamiento AminoLink Plus, Biosoporte UltraLink y resina de acoplamiento SulfoLink.

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