El kit de síntesis de ARNg es un sistema completo para la síntesis rápida de ARN guía (ARNg) listo para el complejo con TrueCut™ Cas9 Protein v2 para ribonucleoproteína de la proteína Cas9 y el ARNg (Cas9 RNP). Este formato Cas9 RNP, con nuestra TrueCut Cas9 Protein v2, ha sido probado en una variedad de líneas celulares adherentes y de suspensión con > 70 % de eficiencia de hendidura y sin indicaciones de toxicidad. A partir de dos oligos cortos monocatenarios que codifican para la secuencia objetivo, el molde de ARNg se monta con un acelerador T7 en ‘’ una reacción directa corta de PCR. El producto montado se utiliza entonces como molde en una reacción de transcripción in vitro (IVT) seguida de un paso de purificación rápida, y produce ARNg preparado para transfección en tan solo cuatro horas. El ARNg resultante también puede ser cotransfected con nuestro ARNm de nucleasa CRISPR Invitrogen™ listo para transfectar. Los formatos Cas9 de proteína y ARNm no requieren ninguna manipulación plasmídica y, por lo tanto, son susceptibles a los enfoques de ingeniería celular de gran capacidad de procesamiento y multiplex de genoma completo.

Las características del kit de síntesis de ARNg GeneArt Precision incluyen:
• Ensamblaje rápido y síntesis de cualquier objetivo de ARNg en apenas cuatro horas incluyendo el montaje del molde
• Alto rendimiento (> 10 ug) y concentración (> 200 ng/ul) de ARNg

Cómo obtener una secuencia de ARNg
la edición del genoma con tecnología CRISPR requiere un ARN guía no codificado (ARNg) para poder dividir el ADN genómico en una secuencia objetivo de interés. El ARNg tiene dos componentes moleculares: un ARN CRISPR (ARNcr) específico del objetivo y un ARNcr transactivante (tracrRNA) que se han combinado en una transcripción. La secuencia objetivo (20 bases) debe ser inmediatamente anterior a un motivo PAM (NGG) que permita al Cas9 iniciar la unión. El PAM está solo en el ADN objetivo y no forma parte de la secuencia CRISPR específica del objetivo. El ARNg y el motivo PAM guían a la nucleasa Cas9 a la secuencia genómica objetivo para formar un complejo y crear una ruptura roma de ADN bicatenaria (DSB) tres nucleótidos antes del sitio PAM.

Use nuestra herramienta de diseño y búsqueda CRISPR para buscar en nuestra base de datos de > 600 000 secuencias de ARNg específicas para cada gen en los genomas humano y de ratón. Los ARNg prediseñados Invitrogen están optimizadas para knockout genético y se centran en los tres primeros exones transcritos para cada gen. Los resultados de la búsqueda incluyen recomendaciones basadas en la minimización de los posibles efectos fuera del objetivo, sitios potenciales de unión y mapas de exón con ubicaciones de ARNg. Esta herramienta también puede usarse para analizar cualquier secuencia de interés para diseñar secuencias CRISPR únicas.

Cómo hacer el ARNg
Una vez seleccionadas las secuencias de ARNg, elija entre tres opciones para hacer el ARNg:
1. ARN guía sintético TrueGuide: elija de nuestro catálogo de ARNg prediseñados o cargue su secuencia en nuestra herramienta de pedido de ARNg TrueGuide
2. Kit de síntesis de ARNg Precision (esta página): para ARNg listo para transfección en tan solo cuatro horas incluyendo el ensamblaje del molde
3. Nuestros servicios de ingeniería de genoma: ahorran tiempo y esfuerzo y se encargan de que nuestro equipo de atención al cliente le diseñe, sintetice y purifique secuencias de ARNg transcritas in vitro (IVT). Para obtener un presupuesto de servicios o para hacer un pedido, póngase en contacto con nuestro equipo de atención al cliente en el número de teléfono 1-800-955-6288 x45682 o por correo electrónico a través de gemservices@thermofisher.com.