El sistema de expresión en E. coli sin células Expressway™ Tag-On-Demand™ con tecnología Lumio™ permite la cómoda expresión in vitro de proteínas con o sin etiqueta a partir de un único vector, la detección en tiempo real de la síntesis de proteínas y la detección fácil de proteínas en gel. Con este sistema:

• Detecte rápidamente los niveles de expresión de proteína de longitud completa
• Ahorre tiempo y esfuerzo clonando solo una vez para expresar proteína marcada o nativa
• Exprese proteína con etiqueta C-terminal a partir del clon Ultimate™ ORF en un sistema in vitro

El sistema Expressway™ Tag-On-Demand™ incluye un lisado de E. coli especializado derivado de un slyD mutante para la síntesis sin células. Este lisado elimina la unión inespecífica del reactivo de detección Lumio™ Green a la proteína SlyD endógena, proporcionando un fondo óptimo para la detección de proteínas recombinantes.

Funcionamiento
Clone el gen de interés que contenga el codón de parada TAG (ámbar) en el vector pEXP4-DEST proporcionado (figura 1). El vector pEXP4-DEST cuenta con sitios attR para una recombinación Gateway™ eficaz, etiquetas C-terminales Lumio y ™ etiquetas 6xHis para una identificación y purificación simplificadas, y componentes para la síntesis de proteínas sin células. En presencia del ARNt supresor Expressway™ Tag-On-Demand™, no se reconoce el codon TAG y la traducción continúa hasta las etiquetas Lumio y ™ 6xHis. En ausencia del tRNA supresor, se reconoce el codón de parada TAG y se produce proteína nativa (Figura 2). A partir del mismo vector, puede determinar rápidamente el nivel de expresión de la proteína de longitud completa con la etiqueta C-terminal y luego expresar la proteína nativa libre de cualquier efecto adverso que la etiqueta pueda tener en su estructura, actividad o interacciones moleculares.