Pierce™ Recombinant Protein G

Aufgereinigtes (nicht konjugiertes) Thermo Scientific Pierce Recombinant Protein G ist die Grundlage für die Vorbereitung verschiedener Arten von Sonden oder Affinitätsmedien für den Nachweis oder die Reinigung von Kaninchen- und menschlichen Antikörpern, insbesondere IgG-Isotypen, in Immunassays und Antikörperreinigungsprotokollen.

Merkmale von Recombinant Protein G:

• Enthält zwei Fc-bindende Domänen pro Protein
• Besser als Protein A für Maus- (inkl. IgG1), Human- (inkl. IgG3) und Ratten-, Ziegen- und Kuhantikörper
• Schlechter als Protein A für Meerschweinchen, Schwein, Hund und Katze
• Bindet kein menschliches IgM, IgD oder IgA

Protein G ist ein bakterielles Zellwandprotein, das aus Gruppe-G-Streptokokken isoliert wird. DNA-Sequenzierung von nativem Protein G identifiziert zwei IgG-bindende Domänen und Stellen für Albumin und Zelloberflächenbindung. Die Bindungsdomänen für Albumin und Zelloberfläche wurden aus rekombinantem Protein G eliminiert, um die unspezifische Bindung zu verringern und können daher zur Trennung von IgG von Rohproben verwendet werden. Die optimale Bindung erfolgt bei pH 5, obwohl die Bindung auch bei pH 7,0 bis 7,2 wirksam ist.

Eigenschaften von Recombinant Protein G:
• Quelle: E. coli
• Molekulargewicht: ∼21.600 (anscheinendes MW nach SDS-PAGE: 32.000)
• Form: Salzfreies Pulver
• A280 von 0,1 % Lösung: 1,0
• Isoelektrischer Punkt (pI): 4,5

Da Protein G für die meisten Säugetier-IgG eine größere Affinität als Protein A aufweist, kann es zur Reinigung von Säugetier-IgG verwendet werden, die nicht gut an Protein A binden. Protein G bindet mit deutlich größerer Kapazität als Protein A an mehrere IgG-Subklassen wie humanes IgG3, Maus-IgG1 und Ratten-IgG2a. Protein G bindet jedoch nicht an Human-IgM, -IgD und -IgA. Unterschiede in den Bindungseigenschaften zwischen Protein A und Protein G können durch die unterschiedlichen Zusammensetzungen in den IgG-Bindungsstellen jedes Proteins erklärt werden. Die tertiären Strukturen dieser Proteine sind sehr ähnlich, obwohl ihre Aminosäurezusammensetzungen erhebliche Unterschiede aufweisen.

Es gibt Inkonsistenzen in den gemeldeten Bindungseigenschaften von IgG zu Protein G. Variationen in der Isolierung und den Herstellungsmethoden für Protein G können die IgG-Bindung beeinträchtigen. Teilweise, weil es unterschiedliche Zahlen von IgG-bindenden Stellen auf verschiedenen Quellen von Protein G gibt. Bindungsstudien wurden mit nativem Protein G und verschiedenen rekombinanten Formen durchgeführt. Zur Bestimmung der relativen Affinität wurden verschiedene Assay-Methoden verwendet, darunter auch Radiolabeling-Experimente und ELISA-Verfahren. Die unterschiedlichen Affinitätsassays können einige der Inkonsistenzen erklären. Darüber hinaus gibt es erhebliche Bindungsunterschiede, wenn verschiedene Puffer verwendet werden. Etwa 44 % mehr IgG aus Rattenserum wurde an Protein G gebunden, wenn Protein-G-Bindungspuffer verwendet wurde, im Vergleich zu 20 mM Tris-Puffer, pH 7,5.

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