Die Thermo Scientific™ NAb™ Protein A Plus-Spin-Kits eignen sich für die schnelle Affinitätsreinigung von Antikörpern im kleinen Maßstab aus einer Vielzahl von Probentypen. Jede vorgefüllte Mikrozentrifugen-Spin-Säule des immobilisierten Proteinharzes ermöglicht eine schnelle Aufreinigung von ≥34 mg humanem IgG aus 0,5 bis 2 ml Serum oder einer anderen Probe. In jedem Kit sind Puffer und ein optimiertes Protokoll zur Reinigung von mindestens zwei Antikörperproben enthalten.

Pierce Protein A Plus-Agarose ist ein vielseitiges Hochleistungs-Affinitätsharz für die Antikörperaufreinigung. Es enthält gereinigtes natives Protein A, das auf hochwertigem, vernetzten 6%igen Agarosegranulat (CL-6B) in hoher Dichte kovalent immobilisiert wurde. Im Vergleich mit anderen erhältlichen immobilisierten Protein-A-Affinitätsharzen zeichnet sich diese Variante durch die vielseitigste Kombination chromatographischer Eigenschaften aus und sorgt bei der Aufreinigung von intaktem IgG aus Serumproben von Säugetieren für hohe Ausbeuten und Reinheit. Dank ihrer physikalischen und chemischen Eigenschaften eignen sich die Agarosekörner für viele Systeme zur Affinitätsreinigung.

Merkmale von Pierce Protein A Plus-Agarose:

• Natives Protein A – immobilisiertes Protein A eignet sich ideal für die polyklonale IgG-Aufreinigung von Human-, Kaninchen-, Schwein-, Hund- oder Katzenserum
• Agarose-Harz – der Träger ist eine vernetzte 6%ige gekörnte Agarose (CL-6B), das beliebteste Harz für Verfahren zur Affinitätsreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – erstklassiges Fertigungsverfahren immobilisiert Protein A durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Hohe Kapazität – diese “Plus”-Variante der Pierce Protein A-Agarose enthält eine große Menge an immobilisiertem Protein A und bietet ein Bindungsvermögen von mehr als 34 mg humanem IgG/ml Harz (circa 16 bis 17 mg Maus-IgG/ml Harz)

Protein A ist eine Zellwandkomponente, die von mehreren Staphylococcus aureus-Stämmen erzeugt wird. Das 46,7-kDa-Protein besitzt eine einzige Polypetidkette, die fast keine Kohlenhydrate enthält. Natives Protein A zeichnet sich durch vier Bindungsstellen mit hoher Affinität aus (Ka= 10^8/mol), die mit der Fc-Region von Antikörpern der Klasse IgG ausgewählter Säugetierarten wechselwirken können. Die Bindung von IgG ist bei einem pH-Wert von 8,2 optimal, aber auch bei neutralen bzw. physiologischen Puffern (pH 7,0 bis 7,6) ist die Bindung effizient.

Protein A stammt von Bakterien und bindet mit hoher Affinität und Spezifität an den Fc-Anteil von Antikörpern, insbesondere der IgG-Klasse. Im Vergleich zum Alternativprodukt (Protein G) besitzt Protein A eine höhere Bindungskapazität für IgG-Unterklassen von Kaninchen, Schweinen, Hunden und Katzen. Protein A bindet auch humanes IgG mit höherer Kapazität, mit Ausnahme von IgG3, das nur schwach gebunden wird. Die Bindung von Protein A an Maus-IgG1 ist schwach und wird für die meisten Anwendungen mit diesem Antikörper-Isotyp nicht empfohlen.

Pierce Protein A Plus-Agarose wird mithilfe der Thermo Scientific AminoLink Kopplungs-Chemie hergestellt. Diese bietet im Vergleich zur herkömmlichen Ligandenimmobilisierung mehrere Vorteile. Bei der AminoLink-Immobilisierung entsteht über einfache Amidbindungen eine Konjugation zwischen Zuckermonomeren des Agarosegranulats und den nativen Lysin-Resten auf dem Protein A. Im Gegensatz zur herkömmlichen Immobilisierung mit Cyanbromid (CNBr) werden durch die AminoLink-Methode keine neuartigen chemischen Gruppen eingebracht, die zu unerwünschten unspezifischen Bindungen führen könnten, und es wird eine stabile und weitgehend irreversible Bindung erzeugt. Das Ergebnis ist ein Harz mit hohem Bindungsvermögen, das auch nach mehreren Runden von Antikörperreinigungen funktionelles immobilisiertes Protein A enthält.

Merkmale der vernetzten 6%igen gekörnten Agarose (CL-6B):
• Unterstützung der pH-Stabilität: 2 bis 14 (kurzfristig); 3 bis 13 (langfristig)
• Durchschnittliche Partikelgröße: 45 bis 165 Mikrometer
• Ausschlussgrenze: 10.000 bis 4.000.000 Dalton
• Maximale volumetrische Durchflussrate: Ca. 1 ml/Minute (für Säulendurchmesser 1 cm)
• Maximale lineare Geschwindigkeit: 30 cm pro Stunde
•Maximaler Druck: weniger als 25 psi (1,5 bar), definiert als der maximale Druckabfall in einer Säule, dem das Harz standhalten kann (Hinweis: Der angezeigte Manometerdruck eines Flüssigkeitschromatographiegeräts gibt möglicherweise den Gesamtsystemdruck und nicht den Druckabfall an der Säule wieder.)

Weitere Produktdaten
• Verwendung von Antikörperbindungsproteinen für die Antikörperaufreinigung

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