Das Thermo Scientific Pierce IgM-Aufreinigungskit ist eine anwenderfreundliche Affinitätsmatrix mit Puffersystem zur Aufreinigung von IgM aus Aszitesflüssigkeit von Mäusen. Bei der Methode kommt immobilisiertes Mannan-bindendes Protein (MBP) zum Einsatz, das in den im Kit mitgelieferten Puffern an IgM bindet.

Pierce MBP-Agarose ist aufgereinigtes Mannan-bindendes Protein (auch als Mannose-bindendes Lektin, MBL, bezeichnet), das auf 4%iger gekörnter Agarose immobilisiert wurde. In Kombination mit einem optimierten Puffersystem erlaubt dieses Harz eine temperatur- und calciumabhängige Bindung und spezifische Affinitätsreinigung von Maus-IgM aus Aszitesflüssigkeit und anderen konzentrierten Proben. Das Harz und die wesentlichen Puffer sind einzeln oder zusammen in Form eines kompletten IgG-Aufreinigungskits erhältlich; das Kit enthält eine vorgepackte 5 ml-Säule mit MBP-Agarose.

Merkmale des IgM-Aufreinigungskits:

• Immobilisiertes MBP – das Affinitätssystem auf der Basis von Mannan-bindendem Protein (MBP) ermöglicht die spezifische Aufreinigung von Maus-IgM aus Aszitesflüssigkeit oder die teilweise Isolierung von humanem IgM aus Serum
• Vollständiges Kit – das IgM Purification Kit enthält eine vorgepackte MBP-Säule und gebrauchsfertige Puffer für eine praktische Aufreinigung von mindestens 1,5 mg IgM aus 0,5 ml Aszitproben pro verwendeter Säule
• Milde Bedingungen – die nicht denaturierenden, nahezu neutralen Pufferbedingungen gewährleisten die Rückgewinnung funktioneller Antikörper
• Wiederverwendbar – stabile Liganden und Harze können regeneriert und mindestens 10 Mal ohne signifikanten Rückgang des Bindungsvermögens wiederverwendet werden

Das Mannan-bindende Protein (MBP), auch Mannose-bindendes Lektin (MBL) genannt, ist ein Säugetierlektin, das in der Leber produziert wird und im Serum vorkommt. MBP besteht aus 18 identischen Untereinheiten mit einer jeweiligen Molekularmasse von ungefähr 31 kDa. Das Protein ist in der Lage, eine Kohlenhydrat-vermittelte Komplementaktivierung zu initiieren.

Das IgM-Aufreinigungskit-Protokoll auf der Basis von immobilisiertem MBP ist am effektivsten für die Aufreinigung von Maus-IgM aus Aszitesflüssigkeit, ermöglicht aber auch die teilweise Aufreinigung von humanem IgM aus Serum. Die Binde- und Elutionsschritte sind temperatur- und calciumabhängig. Die Binde- und Waschschritte werden bei 4 °C in TRIS-Puffer mit 20 mM Calciumchlorid durchgeführt. Elution erfolgt bei Umgebungstemperaturen auch in TRIS-Puffer, der aber EDTA und kein Calciumchlorid enthält. Das Protokoll ist einfach in der Anwendung und ergibt Maus-IgM mit einer Reinheit von 90 % aus Aszitesflüssigkeit. Immobilisiertes MBP kann mindestens zehnmal ohne ersichtliche Abnahme der Bindungskapazität regeneriert werden. Auch humanes IgM bindet an den Träger. Die Bindungskapazität ist aber etwas niedriger, und die Aufreinigung ergibt eine Mischung von IgM mit etwas IgG. Das Aufreinigungssystem wurde nicht für die Verwendung mit anderen Spezies und Probenquellen getestet oder validiert.

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