Imject™ Maleimide-Activated Ovalbumin

Thermo Scientific Imject Maleimide-Activated Ovalbumin ist Sulfhydryl-reaktives Ovalbumin (OVA) zur Hapten-Träger-Konjugation mit Cystein-haltigen Peptiden und anderen thiolhaltigen Antigenen.

Merkmale von Imject Maleimid-aktiviertem Ovalbumin:

• Maleimid-aktiviertes Ovalbumin, lyophilisiert in PBS (pH 7,2) mit Stabilisator geliefert
• Aktiviert mit 5 bis 15 Mol Maleimid pro Mol Ovalbumin
• Ideal zum Konjugieren von Cystein-haltigen Peptid-Antigenen zur Herstellung von Immunogen oder Screening-Ziel
• Konjugationsreaktion in 2 Stunden abgeschlossen; führt zu stabilen, kovalenten Thioether-Bindungen
•Einzelnes Polypeptidprotein mit einer Molekularmasse von 45.000 Dalton
• Enthält 14 Asparaginsäure- und 33 Glutaminsäure-Reste, deren Carboxylgruppen für die negative Nettoladung (pI 4,63) von OVA verantwortlich sind
• Nicht so immunogen wie Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH), aber löslicher in DMSO (Dimethylsulfoxid) für Anwendungen, die dieses Lösungsmittel benötigen
• Nützlich als irrelevanter Proteinträger für Antikörperscreening und Immunoassays nach der Verwendung von KLH als Trägerprotein zur Erzeugung der Immunantwort gegen die Haptene

Dieses Produkt besteht aus gereinigtem Ovalbumin als Trägerstoff, das mit SMCC-Crosslinker modifiziert wurde, um Maleimid-Gruppen anzubinden, die kovalente Kreuzverbindungen zu Sulfhydryl(SH)-Gruppen der Cystein-Rückstände von Peptiden und anderen Molekülen bilden können. Immunogene können leicht aus Peptid-Antigenen hergestellt werden, die mit einem terminalen Cystein-Rückstand als präzisen Konjugationspunkt entwickelt wurden. Mehrere Antigenmoleküle können pro Trägerproteinmolekül gebunden werden, ohne die beabsichtigten Epitope durch Vernetzung mit primären Aminen oder Carboxylaten innerhalb der Peptidsequenz zu blockieren.

Trägerproteine sind große, komplexe Moleküle, die nach Injektion eine Immunantwort auslösen. Wenn Antikörper hergestellt werden sollen, die spezifisch auf kleine Antigene (z. B. Peptide oder Arzneimittelverbindungen) reagieren, dann müssen diese Haptene kovalent an ein größeres, komplexeres Molekül (in der Regel ein Protein) gebunden (konjugiert) werden, um ihnen eine immunogene Wirkung zu verleihen. Die Wahl des Trägerproteins beruht auf der Immunogenität, der Löslichkeit und der erfolgreichen, ausreichenden Konjugation mit dem Trägerprotein.

Ovalbumin (OVA) ist ein Hauptbestandteil von Hühnereiweiß und ein praktisches Protein, das im Labor bei zahlreichen Applikationen zum Einsatz kommt. Das 45 kDa-Protein ist groß und komplex genug, um eine milde immunogene Wirkung hervorzurufen. Folglich kann OVA als Trägerprotein zur Konjugation von Haptenen und anderen Antigenen verwendet werden, um deren Immunogenität für die Immunisierung zu verbessern. Wird OVA auch nicht häufig zur Herstellung von primärem Immunogen verwendet, ist es ein nützliches Trägerprotein, das die Antikörperanalyse mit Antigenen vereinfacht (z. B. Screening-Assays mit beschichteten Platten), wobei die Antikörper mit KLH oder einem anderen, stärker immunogenen Trägerprotein hergestellt worden sind.

Imject Ovalbumin ist weniger immunogen als andere Proteine z. B. Keyhole-Limpet-Hämocyanin (KLH). Die andersartige Struktur macht OVA jedoch zu einem nützlichen Trägerprotein von Peptiden und anderen kleinen Antigenen, deren Handhabung in ungebundener Form in typischen Screening-Assays wie ELISA sonst schwierig wäre. Ovalbumin ist zwar stärker hydrophob und in wässrigen Puffern weniger löslich als BSA. Es bleibt jedoch in bis zu 70 % DMSO löslich, und eignet sich daher besonders für die Konjugation von Haptenen, die in DMSO gelöst werden müssen. Ovalbumin enthält zahlreiche primäre Amine, von denen einige modifiziert wurden, um Maleimide-Activated Ovalbumin zu bilden.

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