Die HT ExoSAP-IT PCR-Produkt-Aufreinigung ist eine alternative Formulierung des ExoSAP-IT Reagenz, die speziell für die einzigartigen Anforderungen von automatisierten Plattformen mit hohem Durchsatz und Mehrkanalpipetten entwickelt wurde. HT ExoSAP-IT Reagenz hat sowohl eine längere Lebensdauer bei höheren Temperaturen als auch eine verringerte Viskosität für den Pipettierroboter.

Wie ExoSAP-IT für PCR-Produkt-Aufreinigung (PN 78200) ist das HT ExoSAP-IT Reagenz eine Mischung aus Exonuklease I und alkalische Phosphatasen aus Garnelen (SAP), die überschüssige Primer und dNTPs nach einer PCR-Reaktion in einer einzigen Inkubation entfernt. Das HT ExoSAP-IT Reagenz verfügt über eine höhere thermische Stabilität und eine niedrigere Viskosität, was eine höhere Anwenderfreundlichkeit in automatisierten 96- und 384-Well-Formaten ermöglicht.

•PCR-Reinigung mit einem Röhrchen — Fügen Sie HT ExoSAP-IT Reagenz direkt zum PCR-Produkt hinzu
•Außergewöhnliche Genauigkeit — Erzielen Sie qualitativ hochwertige Daten selbst bei langen Leselängen
•10 % Probenrückgewinnung — Kein Verlust von PCR-Produkten unabhängig von der Fragmentgröße
•Einfach, ein Schritt — Ersetzt die vielen Schritte und die mit Beads oder Säulen verschwendete Zeit
•Verarbeitung mit hohem Durchsatz — Noch schnellere Ergebnisse mit einer Formulierung mit niedriger Viskosität, die den Einsatz eines Pipettierroboters ermöglicht
•Entfernt überflüssige Primer und dNTPs — Beeinflusst nicht die Sequenzierung
  – von nachgeschalteten Anwendungen
  – SNP-Analyse
  – Single Base Extension (SBE)
  – Fragmentanalyse
  – In-vitroTranskription
•Skalierbar — Verarbeiten Sie Reaktionsvolumina von 5 ml bis 5 l
•Praktische Verpackung — Erhältlich in Streifen mit 8 Röhrchen und 12 Röhrchen in einer 96-Well-Platte
•Stabil bei +25 °C für 8 Stunden — Hält die volle Funktionsfähigkeit und ist bei 45 °C für eine Woche stabil

Das HT ExoSAP-IT Reagenz wird dem PCR-Produkt direkt hinzugefügt und bei 37 °C 15 Minuten lang inkubiert. Nach der PCR-Behandlung wird es einfach deaktiviert, indem es 15 Minuten lang auf 80 °C erhitzt wird. Unsere Hochdurchsatz-Formulierung ist für Pipettierroboter und Mehrkanalpipetten konzipiert. Das HT ExoSAP-IT Reagenz hat eine geringere Viskosität als die Standardmischung und ist für einfache Handhabung in Streifen mit 8 Röhrchen erhältlich.

Das HT ExoSAP-IT Reagenz nutzt zwei hydrolytische Enzyme, Exonuklease I und SAP, zusammen in einem speziell formulierten Puffer, um unerwünschte dNTPs und Primer aus PCR-Produkten zu entfernen. Exonuklease I entfernt die verbleibenden einzelsträngigen Primer und jegliche in der PCR produzierte irrelevante einzelsträngige DNA. SAP entfernt die restlichen dNTPs aus der PCR-Mischung.

Einfach: Einzelschritt-
HT ExoSAP-IT Reagenz erfordert nur einen Pipettierschritt und zwei Inkubationen. Fügen Sie einfach HT ExoSAP-IT Reagenz zum PCR-Produkt hinzu, und innerhalb von 30 Minuten können Sequenzierung, SNP-Analyse, Single Base Extension (SBE) oder Fragmentanalyse durchgeführt werden. Die enzymatische Entfernung überschüssiger Primer und nicht aufgenommener Nukleotide erfolgt in einem einfachen Schritt, indem HT ExoSAP-IT Reagenz in einem einzelnen Röhrchen, Streifen mit 8-Röhrchen oder 12 Streifen in einer 96-Well-PCR-Platte mit niedrigem Rand verwendet wird. Unsere neue Formatierung macht dieses Produkt zu einem idealen Produkt für den Einsatz mit Robotern.

Außergewöhnliche Präzision mit HT ExoSAP-IT
Erzielen Sie hohe Datenqualität und Sequenzierungsgenauigkeit mit HT ExoSAP-IT, auch bei langen Leselängen. Sequenz-Lesevorgänge von PCR-Produkten, die mit HT ExoSAP-IT behandelt wurden, waren im Durchschnitt 50+ Basen länger als Proben, die mit Konkurrenzprodukten behandelt wurden. Mit humaner genomischer DNA wurde ein 1007 bp-Fragment ohne Fehler sequenziert. Die Größenbeschränkungen im Zusammenhang mit alternativen PCR-Reinigungsmethoden spielen bei HT ExoSAP-IT keine Rolle. Phred 20-Werte über die gesamte Länge einer 970 bp-Sequenz waren 822 ± 9 mit HT ExoSAP-IT-behandelten Proben und nur 776 ± 83 mit mit Agencourt™ AMPure™ XP behandelten Proben.

Kein Probenverlust
Durch die Verwendung von HT ExoSAP-IT werden alle Gel- oder Säulenreinigungen, Sedimentierungen, Filtrationen, Beads und/oder magnetischen Trennungen⁽¹⁾ eliminiert. Mit HT ExoSAP-IT erfolgt eine 100%ige Rückgewinnung von kurz- und langen PCR-Produkten.

Mit HT ExoSAP-IT-behandelte PCR-Produkte sind stabil
Das HT ExoSAP-IT Reagenz wird streng getestet und unterliegt einer strengen Qualitätskontrolle. Nach der Lagerung eines mit HT ExoSAP-IT behandelten PCR-Produkts für eine Woche bei 24 °C trat keine Produktzersetzung auf.

Literatur:
1. DUGAN, K. A., LAWRENCE, H. S., HARES, D. R., FISHER, C. L. AND BUDOWLE B. (2002) J. Forensic Sci 47, 811-818.
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4. SILVA, JR., W. A., COSTA, M. C. R., VALENTE, V., DE FREITAS SOUSA, J., PACÓ-LARSON, M. L., ESPREAFICO, E. M., CAMARGO, S. S., MONTEIRO, E., DE JESUS, A., HOLANDA, M. A., ZAGO, M. A., SIMPSON, A. J. G. AND NETO, E. D. (2001) BioTechniques 30, 537-542.
5. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4354-4355.