Thermo Scientific HisPur Ni-NTA Chromatographie-Kassetten enthalten ein hochleistungsfähiges, Nickel-basiertes IMAC-Harz mit hoher Kapazität zur routinemäßigen Affinitätsreinigung von His-markierten Fusionsproteinen.

Eigenschaften von HisPur Ni-NTA Harz:

• Hohe Kapazität – Bindet bis zu 60 mg 6xHis-markiertes Protein pro Milliliter Harz
• Vielseitig – Proteine unter nativen oder denaturierenden Bedingungen aufreinigen
• Kompatibel – Mit Thermo Scientific Zelllysereagenzien und einer Vielzahl von Pufferadditiven zu verwenden
• Kosteneffizient – Eine Harzcharge mindestens 5 Mal wiederverwenden
• Anwenderfreundlich – Vorformulierte Puffer für Kit-Formate
• Flexibel – Erhältlich in verschiedenen Formaten, einschließlich Harz-Massenware, Spin-Säulen, Chromatographie-Kassetten und 96-Well-Filterplatten

Der speziell vorbereitete Träger besteht aus mit dem Nitrilotriessigsäure(NTA)-Chelatbildner derivatisierten Agarosebeads, die mit zweiwertigen Nickel-Ionen (Ni²⁺) beladen sind. Das immobilisierte Metallaffinitätschromatographieharz (IMAC) bietet außergewöhnliche Bindungskapazität und Leistung für die rekombinante His-markierte Proteinaufreinigung.

Die Expression und Aufreinigung rekombinanter Proteine ist ein zentraler Punkt für Proteinregulation, Struktur- und Funktionsstudien. Die Mehrheit der rekombinanten Proteine wird als Fusionsproteine mit kurzen Affinitätstags exprimiert; das gängigste darunter ist das Polyhistidin(6xHis)-Tag. Die Methode zur Reinigung rekombinanter His-markierter Proteine ist die immobilisierte Metallaffinitätschromatographie (IMAC), die aus Chelatharzen besteht, die entweder mit Nickel- oder Kobalt-Ionen geladen sind und sich koordinativ an die Histidin-Seitenketten anlagern.

HisPur Ni-NTA-Harz reinigt effektiv hohe Mengen an überexprimierten His-markierten Fusionsproteinen aus bakteriellen Lysaten, wie sie mit Thermo Scientific B-PER Bacterial Protein Extraktionsreagenzien erreicht werden. Das Harz zeigt sowohl bei Batch- als auch bei Zentrifugations-basierten Verfahren in unterschiedlichen Maßstäben gute Leistungen. Dabei entspricht oder übertrifft die Performance die von gängigen Ni-NTA-Harzen anderer Anbieter. HisPur Ni-NTA Resin ist ein hochwertiger, stabiler und belastbarer Affinitätsträger. Tests bestätigen, dass die Leistung auch nach mindestens fünf Wiederverwendungen nicht nachlässt. Diese Daten zeigten, dass das Harz während des normalen Gebrauchs sehr widerstandsfähig gegen strukturelle Degradation oder Auslaugen von Nickel-Ionen ist.

HisPur Ni-NTA Harz und HisPur Cobalt Harz sind alternative Formen von IMAC, die erstere verwendet Nickel und die letztere verwendet Kobalt als das chelierte Metallion, das für die His-Tag-Bindung verantwortlich ist. Die am meisten verwendeten IMAC-Harze für die Reinigung von 6xHis-Tag-Proteinen sind Ni-NTA-Harze. Aufgrund der vier Metallbindungsstellen auf dem Chelat verbinden sie hohe Proteinbindungskapazitäten mit geringem Auslaugen von Metallionen. Kobalt geht weniger starke und daher auch stärker diskriminante Bindungen ein, was sich bei der Reinigung von His-markierten Proteinen durch höhere Reinheit, aber auch geringere Erträgen auswirkt.

Verfügbare Formate:
• Harzsuspensionen — Vernetzte, 6%ige Beadagarose; 10 ml-, 100 ml-, 500 ml-Flaschen
• Spin-Säulen — 0,2 ml- (Mikrozentrifuge), 1 ml-, 3 ml-Säulen
• Reinigungs-Set — Komplettkits in allen drei Säulengrößen
• Chromatographie-Kassetten—Mehr erfahren und Daten zu HisPur Chromatographie-Kassetten ansehen
• 96-Well-Spin-Platten

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