Die Carbonyl-reaktiven Thermo Scientific™ aminoxyTMT™ (Tandem Mass Tag™) Markierungsreagenzien ermöglichen eine Multiplex-Charakterisierung und -Quantifizierung von Carbonyl-haltigen Biomolekülen (Kohlenhydrate, Steroide, oxidierte Proteine) mittels Massenspektrometrie (MS).

Die aminoxyTMTsixplex Markierungsreagenzien teilen sich eine identische Struktur mit aminoxyTMTzero Reagenz, enthalten aber im Massenreporter verschiedene Anzahlen von 13C- und 15N-Isotopen. Das optimierte Markierungsverfahren kann in 1 Stunde abgeschlossen werden. Nach der Markierung mit Tags werden die Proben vor der Massenspektrometrie-Analyse mit HILIC-Festphasenextraktion gequencht und gereinigt.

Die sechs zusätzlichen Verbindungen des aminoxyTMTsixplex™ Reagenzien-Sets haben die gleiche (d. h. isobare) Masse und chemische Struktur (Carbonyl-reaktive Aminoxygruppe, Spacerarm und Massenreporter). Die spezifische Verteilung von 13C- und 15N-Isotopen auf beiden Seiten des HCD- oder ETD-MS/MS-Fragmentierungsortes in jedem Reagenz führt jedoch zu einer einzigartigen Reportermasse (126–131 Da) im Bereich mit geringer Masse. Dieses Reporterionen-Set wird zur Messung der relativen Häufigkeit markierter Moleküle in einer kombinierten (gemultiplexten) MS-Probe verwendet, die sechs verschiedene Behandlungsbedingungen darstellt. Für Glykobiologie-MS-Anwendungen ermöglichen die Reagenzien das quantitative Profiling von Glykan-Isoformen und die Entdeckung von Glykan-Biomarkern. Sie bieten eine verbesserte Ionisierung markierter Glykane für eine erhöhte Empfindlichkeit und eine bessere Retention markierter Glykane durch Umkehrphasenflüssigkeitschromatographie (RPLC). Die aminoxyTMT Reagenzien können zur Quantifizierung einer breiten Palette biologisch wichtiger Moleküle, einschließlich Kohlenhydraten, Steroiden oder oxidierter Proteine, verwendet werden.

Merkmale:

• Quantitativ – Ermöglicht die relative Quantifizierung von Glykanen oder anderen Carbonyl-haltigen Biomolekülen aus mehreren Proben, die aus Zellen, Geweben oder biologischen Flüssigkeiten gewonnen wurden
• Stabil – Die Oximbindung und die Produkte, die durch die Markierungsreaktion gebildet werden, sind stabil und erfordern keinen zusätzlichen Reduktionsschritt
• Effizient – Erzielen einer Markierungseffizienz von mehr als 90 % im Laufe einer Stunde
• Empfindlich – 20-fache Verbesserung des Signal-Rausch-Verhältnisses im Vergleich zur MS-Analyse von nicht markiertem, nativem Glykan
• Multiplex – Kann bis zu sechs Proben gleichzeitig identifizieren und charakterisieren
• Optimiert – Verfahren und Reagenzien sind für eine ausgezeichnete Markierungseffizienz und die Rückgewinnung von Glykanen optimiert

Lieferumfang:
• Markierungsreagenzien-Sets enthalten ausreichend aminoxyTMT-Tags für fünf sixplex-Experimente

Erforderlich:
•PNGase F- (oder PNGase A)-Glykosidase und Waters Oasis™ HLB-Säulen

Anwendungen:
• Multiplexen von bis zu 6 verschiedene Proben gleichzeitig in einem einzigen Experiment
• Relative Quantifizierung von Glykanen
• Untersuchung der strukturellen Vielfalt der Proteinglykosylierung
• Untersuchung der Glykosylierung in der Zellsignalweiterleitung und -regulation
• Untersuchung zum Fortschreiten von Krebserkrankungen, zu neuen Biomarkern und der Analyse von Biotherapeutika

Native Glykane sind aufgrund ihrer schlechten Ionisierungseffizienz durch Massenspektrometrie schwer zu untersuchen. Die Quantifizierung von Glykanen stellt eine besondere Herausforderung dar, da es keine Standards für alle natürlich vorkommenden Glykane gibt und es schwierig ist, mehrere Proben reproduzierbar zu quantifizieren. Die Aminoxygruppe hat eine bessere Reaktivität mit Carbonylen und eine bessere Stabilität des markierten Produkts im Vergleich zu Hydraziden. Das Markieren mit den aminoxyTMT Reagenzien verbessert die Ionisierung von Glykanen und so die Empfindlichkeit und ermöglicht eine relative Quantifizierung von Glykanen für bis zu sechs Proben gleichzeitig.

Die Tandem Mass Tag (TMT) Reagenzienfamilie besteht aus TMTzero, TMTduplex, TMTsixplex und TMT10plex Sets, die speziell für einen schnellen und kostengünstigen Übergang von der Methodenentwicklung zur Proteinquantifizierung mit hohem Durchsatz entwickelt wurden. Der TMTzero-Tag ermöglicht das Testen und Optimieren der Probenvorbereitung, Markierung, Fraktionierung und MS-Fragmentierung für den Peptid- und Reporternachweis ohne teurere isotopenmarkierte Verbindungen. Der TMTsixplex Reagenzsatz ermöglicht das Erstellen von 6-Plex-Proteinprofilen für mehrere Bedingungen, wie Zeitverläufe, Dosisreaktionen, Replikate oder Probenvergleiche. Jeder TMT-Tag basiert auf derselben chemischen Struktur, sodass zwischen Experimenten keine Änderungen der Markierungs- oder HPLC-Trennungsbedingungen erforderlich sind.

Für diese Produkte gilt eine eingeschränkte Nutzungslizenz für die Markierung.

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