Das GeneArt™ PLUS Kit für die nahtlose Klonierung und Assemblierung ist, wie unser Kit für nahtlose Klonierung und Assemblierung der ersten Generation auch, ein komplettes Kit für das simultane und direktionale Klonen von 1 bis 4 PCR-Fragmenten, bestehend aus einer beliebigen Sequenz, in jeden linearisierten Vektor, im Rahmen einer 30 Minuten oder weniger andauernden Reaktion bei Raumtemperatur. Seamless PLUS bietet jedoch gegenüber früheren Kits mehrere Vorteile:

• Höhere Effizienz: Möglichkeit der Vor-Klonierung großer Fragmente für erhöhte Klonierungs-Effizienz
• Größere Konstrukte: Erstellen Sie Konstrukte von bis zu 40 kb
• Vielseitigkeit: konjugativer Vektor mit hoher Kapazität und breitem Spektrum, der in den meisten gramnegativen Bakterien repliziert

Die oben genannten Verbesserungen werden mit den wichtigsten Vorteilen kombiniert, die alle GeneArt™ Kits für die nahtlose Klonierung und Assemblierung bieten:

• Schnell und einfach—Klonen von bis zu 4 DNA-Fragmenten, mit der Sequenz Ihrer Wahl, simultan in einem einzigen Vektor; keine Stellen für Restriktionsverdau, Ligation oder Rekombination erforderlich
• Präzise und effizient — So konzipiert, dass beliebige Klonierungen mit einer Ausbeute von bis zu 90 % der korrekten Klone vorgenommen werden können, ohne zusätzliche Sequenzen zurückzulassen
• Kostenlose Tools — Entwerfen Sie Ihr endgültiges Konstrukt und Ihre DNA-Oligos in silico mit unserem kostenlosen webbasierten Tool, das Sie Schritt für Schritt durch Ihr Projekt führt
• Vektorflexibilität — Nutzen Sie unseren linearen Vektor oder einen Vektor Ihrer Wahl
• Diverse Anwendungen— Optimieren Sie synthetische und molekularbiologische Techniken durch rasche Kombination, Addition, Löschung oder Austausch von DNA-Segmenten

Ziehen Sie für das Klonen von mehr als 4 DNA-Fragmenten oder für Endmoleküle mit einer Größe von mehr als 110 kb, das GeneArt™ High-Order Genetic Assembly System in Betracht.

Einfache und schnelle Klonerstellung
GeneArt™ Seamless PLUS Klonierung ist ein einfacher, zweistufiger Prozess, der aus In-vitro-Assemblierung besteht, gefolgt von der Transformation in One Shot™ DH10B™ T1R SA kompetente E. coli. Das Kit assembliert DNA-Fragmente mit gemeinsamer Homologie der terminalen Enden mit Hilfe eines firmeneigenen Enzym-/Puffer-Gemischs, ohne zusätzliche Sequenzen oder Narben im Endkonstrukt (“nahtlos”). Die Endhomologie lässt sich einfach durch PCR-Amplifikation mit individuellen DNA-Oligos integrieren, die mit unserem kostenlosen Webtool entwickelt wurden.

Klonierungseffizienz, Flexibilität und Präzision
Mit dem GeneArt™ Assemblierungs-Kit für die nahtlose Klonierung sind die Größe der DNA-Elemente (100 bp bis 10 kb), die Gesamtgröße des Endmoleküls (≤ 40 kb) sowie die Qualität und Spezifität des Fragments die Hauptfaktoren für die Effizienz des Kloniervorgangs.

Typische Klonierungseffizienz für verschiedene Fragmentzahlen:

• > 95 % für 4 Fragmente von je 5 Kb
• > 90 % für 4 Fragmente von je 10 Kb

Der Erfolg der Klonierung ist unabhängig von Insertsequenz und Vektortyp. Sie können also nahezu jede gewünschte Sequenz oder Sequenzkombination erstellen und einem Plasmid hinzufügen, solange es entweder durch Restriktionsenzymverdau oder PCR linearisiert werden kann. Die durch die Reaktion erhaltenen zirkulierten Klone enthalten nur die Sequenz Ihres ursprünglichen Vektors, Inserts und designierte Homologien ohne überflüssige Nucleotid-Einfügungen.

In silico Design-Support
Ein wichtiger Schritt bei GeneArt™ nahtloser Klonierung ist das richtige Design von Fragmenten und Oligos mit der entsprechenden Homologie und dem passenden Abstand, um eine erfolgreiche Assemblierung Ihres Klons zu gewährleisten. Wir bieten ein kostenloses Online-Tool, das GeneArt™ Design Tool für nahtlose oder High-Order-Assemblierung und Mutagenese, mit dem Sie Ihr Experiment in silico per Computersimulation gestalten können. Das Tool prüft die Kompatibilität des experimentellen Designs mit den Produktspezifikationen, entwirft DNA-Oligos mit Endhomologie für die PCR-Amplifikation der verschiedenen zu klonenden Elemente. Außerdem präsentiert es dem Anwender eine grafische Darstellung des Vektors sowie eine herunterladbare kommentierte Sequenz im GenBank Format, die mit der Vector NTI™ Software kompatibel ist.

Anwendungen
Das GeneArt™ PLUS Kit für die nahtlose Klonierung und Assemblierung wurde entwickelt, um unter anderem Klonierungen und DNA-Assemblierung in zahlreichen Anwendungen in der Molekularbiologie und synthetischen Biologie zu ermöglichen. Das Produkt ermöglicht die Erstellung von modularen Expressionsvektoren mit austauschbaren Teilen und kann für die Ausführung einer Vielzahl verschiedener Aufgaben verwendet werden, die sonst mehrere Schritte umfassen. Das Kit eignet sich für die Herstellung von Fusionsproteinen, Entfernung, Austausch oder Hinzufügen von DNA-Elementen wie Restriktionsstellen in einem vorhandenen Vektor sowie für viele andere Verfahren, die eine Manipulation der genetischen Sequenzen erfordern.