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Katalognummer | Menge |
---|---|
A39260 | 10 x 1 mg |
33033 | 10 mg |
Typisches Protokoll für Label-Transfer-Experiment:
• Geben Sie ein paar Mikroliter gelöstes Sulfo-SBED Reagenz zu 0,5 – 1 ml aufgereinigtem Köderprotein in PBS.
• Die Mischung 30 bis 120 Minuten auf Eis oder bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren.
• Entsalzen oder dialysieren (bei gedämpftem Licht), um überschüssiges, nicht reagiertes Sulfo-SBED von dem markierten Köderprotein zu entfernen.
• Fügen Sie markiertes Köderprotein zum Zelllysat oder einer anderen Lösung hinzu, die vermeintliche Zielproteininteraktoren („Beute“) enthält.
• Wenn sich Interaktionskomplexe gebildet haben, setzen Sie die Lösung für mehrere Minuten ultraviolettem Licht (365 nm) aus.
• Analysieren Sie Produkte mit einer der folgenden Methoden:
• Western Blotting: Kreuzverbindungen in DTT spalten, Proteine durch SDS-PAGE trennen und biotinylierte Banden durch Western Blotting mit Streptavidin-HRP nachweisen.
• Aufreinigung und Massenspektrometrie oder Sequenzierung: Affinitätsreinigung biotinylierter Proteine oder Peptidfragmente nach Trypsin-Verdauung und Durchführung von MS oder Sequenzierung zur Charakterisierung der beteiligten Proteine.
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