Das Ambion ™ RNaseAlert™ Labortestkit ist eine zum Patent angemeldete Technologie, die die RNase-Aktivität in einem praktischen und empfindlichen Assay erkennt, der Ergebnisse in Echtzeit liefert. Geeignet für die Untersuchung kleiner Probenmengen und um sicherzustellen, dass Lösungen, Röhrchen, Spitzen usw. RNase-frei sind; das Kit enthält ausreichend Reagenzien für 25 Reaktionen.
• Erkennt bereits 3,5 x 10-7 Einheiten (∼0,5 pg) RNase A mit einem Fluorimeter oder mit dem bloßen Auge
• Unkomplizierter und einfacher 30-minütiger Assay
• Überwachen der RNase-Aktivität in Säulenfraktionen während der Proteinaufreinigung
• Zur Verwendung mit DNaseAlert™ zur quantitativen Erkennung von RNasen und DNasen in derselben Probe
Das RNaseAlert™ QK-System verwendet ein neuartiges RNA-Substrat, das mit einem fluoreszierenden Reportermolekül (Fluor) an einem Ende und einem Quencher am anderen Ende markiert ist. Wenn keine RNasen vorhanden sind, dämpft die physikalische Nähe des Quenchers die Fluoreszenz vom Fluor auf extrem niedrige Konzentrationen. Wenn RNasen vorhanden sind, wird das RNA-Substrat jedoch gespalten, und Fluor und Quencher werden räumlich in Lösung getrennt. Dadurch gibt Fluor ein hellgrünes Signal aus, wenn es durch Licht der entsprechenden Wellenlänge angeregt wird. Die Fluoreszenz kann bei der Beleuchtung auf einer UV-Box oder mit einem Filter- oder Monochromator-Fluorometer leicht mit bloßem Auge erkannt werden. Da bei Vorhandensein von RNase-Aktivität die Fluoreszenz des RNaseAlert™ Substrats mit der Zeit zunimmt, können die mit einem Fluorometer überwachten Ergebnisse kinetisch ausgewertet werden. Die Sequenz des RNaseAlert™ Substrats wurde sorgfältig optimiert, um mehrere RNasen zu erkennen, darunter RNase A, RNase T1, RNase I, Mikrokokken-Nuklease, S1-Nuklease, Mungbohnen-Nuklease und Benzonase™.
Schnelles und praktisches Protokoll
Das RNaseAlert™ Verfahren benötigt für die Einrichtung nur wenige Minuten. Das lyophilisierte und fluoreszierende Substrat wird im mitgelieferten Röhrchen rekonstituiert und 30 bis 60 min lang mit der Testlösung bei 37 °C inkubiert. Die Ergebnisse werden dann auf einem Transilluminator oder Fluorometer abgelesen. Proben, die im Vergleich zur Negativkontrolle deutlich fluoreszieren, sind kontaminiert und sollten nicht mit RNA verwendet werden. Nukleasefreies Wasser und RNase A sind als Kontrollen lieferbar.
Zubehörprodukt:
Das RNaseAlert™ QK-System ist für Hochdurchsatz-Assays auch in einem 96-Well Format (SKU# AM1966) erhältlich. RNaseAlert™ ist außerdem vollständig kompatibel mit dem Ambion™ DNaseAlert™ QK-System (SKU# AM1970). Da das DNaseAlert™ Substrat einen fluoreszierenden Tag enthält, der sich spektral von RNaseAlert™ unterscheidet, können die beiden Kits gleichzeitig mit einem Fluorometer für quantitative Echtzeitanalysen von RNasen und DNasen in einer einzigen Probe verwendet werden.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.