Click-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488, 594 und 647 Assays für den In-situ-Apoptosenachweis können apoptotische Zellen in Gewebe- und Zellkulturproben nachweisen, indem sie eine kleine, hochgradig spezifische Markierung und einen hellen Fluoreszenzfarbstoff einarbeiten. Nach Einarbeitung des Markierungsanteils in DNA-Fragmente erfolgt der Nachweis über eine katalysierte „Klick“-Reaktion unter Bedingungen, die das emittierte Fluoreszenzsignal von GFP oder RFP erhalten.

Weitere Vorteile des Click-iT Plus TUNEL-Assays für den In-Situ-Apoptosenachweis:
• Optimiert für den Nachweis apoptotischer Zellen in Gewebe- oder Zellproben
• Multiplex-fähig: Optimiert für die Arbeit mit fluoreszierenden Farbstoffen oder Proteinen wie GFP und RFP
• Verbesserter TUNEL-Assay: Besserer Einbau der Markierung dank eines kleinen reaktiven Anteils
• Helle apoptotische Signale: nutzt Alexa Fluor Farbstoffe, die ein stabiles Fluoreszenzsignal ohne Photobleichung erzeugen
• Flexibilität: Assay ist für gleichzeitige Tests von 1 bis 50 Proben verwendbar

Fragmentierung der zellulären DNA ist ein Kennzeichen von Apoptose. Der TUNEL-Assay ist die am weitesten verbreitete Methode zum Nachweis fragmentierter DNA in apoptotischen Zell- oder Gewebeproben. Der TUNEL-Assay beginnt durch den Einbau modifizierter dUTP am 3'-OH Ende der fragmentierten DNA. Die dUTP-Modifikation besteht oftmals in der Kopplung eines Fluorophors. Aufgrund der Größe des Fluorophors kann das modifizierte dUTP niedrigere als erwartete Einarbeitungsraten aufweisen, was sich auf die Empfindlichkeit des TUNEL-Assays auswirken kann. Zudem weisen viele der in derzeit verfügbaren TUNEL-Assay-Kits enthaltenen Fluorophore Probleme mit Photobleichung und Fluoreszenzspektralüberlappungen auf, die beide die Empfindlichkeit und Multiplex-Möglichkeiten des Assays einschränken.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay soll diese Probleme umgehen. Der Assay verwendet dUTP, modifiziert mit einer Alkingruppe (eine kleine bioorthogonale funktionelle Gruppe), wodurch die Nukleotide leichter aufgenommen werden. Nach dem Einbau führt eine hochgradig spezifische „Klick“-Reaktion zwischen der Alkingruppe und einem Alexa Fluor Picolylazid-Fluoreszenzfarbstoff mit anschließendem Nachweis dieses Farbstoffs zu einem empfindlichen und spezifischen Assay für die Erkennung apoptotischer Zellen oder Gewebeproben. Aufgrund der schonenden Reaktionsbedingungen ermöglicht der Click-iT Plus TUNEL-Assay das Multiplexing mit fluoreszierenden Proteinen oder Farbstoffen.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay wurde validiert mit mehreren verschiedenen Formalin-fixierten, Paraffin-eingebetteten Gewebetypen. In allen Fällen ist das Multiplexing mit fluoreszierenden Proteinen und Farbstoffen möglich. Auch die Aktinfärbung mit fluoreszenzmarkiertem Phalloidin ist möglich.

Der Click-iT Plus TUNEL-Assay enthält alle erforderlichen Reagenzien zum Nachweis apoptotischer Zellen in Gewebe- oder Zellproben. Die Reagenzien in diesem Kit reichen zum Testen von 50 Proben und können für die gleichzeitige Analyse von 1 bis 50 Proben verwendet werden.