Thermo Scientific Phusion High-Fidelity DNA-Polymerasen setzen einen neuen Gold-Standard für die Hochleistungs-PCR. Mit einer 50 Mal niedrigeren Fehlerrate als Taq und einer 6 Mal niedrigeren Fehlerrate als Pfu ist Phusion High-Fidelity DNA-Polymerase eine ausgezeichnete Wahl für Klonierungen und andere Anwendungen, bei denen eine hohe Genauigkeit ausschlaggebend ist. Die Phusion DNA-Polymerasen bieten eine zuverlässige Leistung mit kurzen Protokollzeiten, auch in Gegenwart von PCR-Inhibitoren, und erzeugen höhere Ausbeuten mit geringeren Enzymmengen als andere DNA-Polymerasen.

Besondere Merkmale

• Ansetzen der Reaktion bei Raumtemperatur
• Keine unspezifische Amplifikation und Primer-Abbau bei der Reaktionsvorbereitung
• Nullzeit-Reaktivierung durch einzigartige Heißstart-Technologie
• Hohe Wiedergabetreue (52X Taq)
• Schnelle PCR durch kurze Extensionszeiten (15 bis 30 s/kb)
• Robuste Reaktionen, minimale Optimierung erforderlich
• Höhere Produktausbeute bei minimalen Enzymmengen
• Erhältlich als Green Puffer-Format für direktes Auftragen auf Gele (F-566S oder F-566L)

Mit der Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase verläuft die Amplifikation ohne Herstellung unspezifischer Produkte, und zwar aufgrund der Kombination von Phusion DNA-Polymerase und einem reversibel gebundenen, spezifischen Affibody-Liganden, der die DNA-Polymerase-Aktivität bei Raumtemperatur hemmt. Der Affibody-Ligand hemmt auch die 3´→5´-Exonuklease-Aktivität der Polymerase und verhindert so den Abbau von Primern und der Template-DNA beim Ansetzen der Reaktion. Bei Temperaturen, die Polymerase-Aktivität fördern, wird der Ligand freigesetzt, was zur vollständigen Aktivierung der Polymerase führt. Die Phusion Hot-Start II DNA-Polymerase wird bei hohen Temperaturen sofort wieder aktiviert. Deshalb erfordert sie bei PCR-Protokollen keinen separaten Aktivierungsschritt. Der Phusion Hot-Start II PCR Master Mix mit hoher Wiedergabetreue ist ein praktisches 2X Gemisch, das zur Reduzierung der Anzahl der Pipettierschritte entwickelt wurde. Der Mastermix enthält Phusion Hot Start II DNA-Polymerase, Nukleotide und optimierten Reaktionspuffer, einschließlich MgCl₂. Der PCR-Reaktion müssen lediglich das Template und die Primer zugegeben werden.

Anwendungen

• PCR mit hoher Wiedergabetreue
• Hoher Durchsatz
• Amplifikation schwieriger (GC-reicher) Templates
• Template-Generierung für die Sequenzierung
• Multiplex PCR
• Long-Range-PCR
• Klonierung
• Mutagenese
• Microarray

Verwendung der Phusion DNA-Polymerasen
Annealing-Regeln für Phusion DNA-Polymerasen unterscheiden sich von vielen gängigen DNA-Polymerasen (wie Taq DNA-Polymerasen). Optimale Ergebnisse erzielen Sie mit unserem Tm-Rechner unter www.thermofisher.com/tmcalculator.