Das LIVE/DEAD™ Fixable Green Dead Cell Stain Kit dient der Bestimmung der Zellviabilität vor einer Fixierung und Permeabilisierung, die für die intrazelluläre Färbung mit Antikörpern erfoderlich ist, oder der Beseitigung biogefährlicher Materialien mittels Formaldehyd-Fixierung. Dieses Kit wurde für die Verwendung mit einem Durchflusszytometer mit blauem Laser optimiert und validiert.
• Stabil — Farbstoffe werden in separaten Fläschchen gefriergetrocknet, um Stabilität zu erhalten
• Robust — Färbemuster ist vor und nach der Fixierung gleich
• Helles Signal — Ermöglicht eine einfache Unterscheidung zwischen lebenden/toten Zellen in einem Kanal
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Auswahlanleitung für alle fixierbaren Viabilitätfarbstoffe für die Durchflusszytometrie an.
StabilIm Gegensatz zu Produkten, die als Lösung verkauft werden, wurden die LIVE/DEAD™ Fixable Green Stain praktisch in 40 Testfläschchen verpackt, um eine langanhaltende Stabilität und Leistung des Farbstoffs zu gewährleisten. Amin-reaktive Farbstoffe in Lösung verlieren ihre Wirksamkeit nach kurzer Zeit. Es ist daher empfehlenswert, das Röhrchen nach der Rehydrierung komplett aufzubrauchen. Falls dies nicht möglich ist, aliquotieren Sie die Röhrchen in kleinere Volumen, und bewahren Sie diese bei -80 °C unter Vermeidung von wiederholtem Einfrieren und Auftauen auf.
RobustFarbstoffe, die zur Kenntlichmachung toter Zellen eingesetzt werden, können nach bestimmten Behandlungsverfahren an Empfindlichkeit verlieren. Dazu gehören die Behandlung mit Fixiermitteln wie Formaldehyd oder Fixiermethoden, die auf Ethanol basieren und die für intrazelluläre Phosphorylierungsstudien benötigt werden. Der LIVE/DEAD™ Fixable Green Stain ist ein Amin-reaktiver Farbstoff, der kovalent an intrazelluläre und extrazelluläre Amine bindet. Das Färbungsmuster bleibt nach der Formaldehyd-Fixierung erhalten.
Optimale HelligkeitDer LIVE/DEAD™ Fixable Green Stain wurde wegen seiner fluoreszierenden Eigenschaften ausgewählt und erzeugt nach Anregung durch einen blauen 488-nm-Laser ein helles Signal. Der grün-fluoreszierende reaktive Farbstoff hat ein Anregungsmaximum bei ∼495 nm, ideal für den Einsatz mit einem blauen Laser, und eine Emission bei ∼520 nm zur Detektion im FITC-Kanal. Da lebende und tote Zellen mit einem einzigen Farbstoff und einem einzigen Kanal eines Durchflusszytometers diskriminiert werden können, ist er ideal für mehrfarbige Experimente.
FunktionsweiseIn Zellen mit beeinträchtigten Membranen reagiert der Farbstoff mit freien Aminen sowohl im Zellinneren als auch auf der Zelloberfläche, was zu einer intensiven fluoreszierenden Färbung führt. Bei lebensfähigen Zellen ist die Reaktivität des Farbstoffs auf die Amine der Zelloberfläche beschränkt und die Fluoreszenz weniger intensiv. Der Unterschied zwischen den Intensitäten beträgt in der Regel mehr als das 50-Fache zwischen lebenden und toten Zellen, sodass eine Unterscheidung problemlos möglich ist.
Erhältliche FarbenLIVE/DEAD™ Fixable Dead Cell Stains sind in unterschiedlichen Farben erhältlich, um eine flexible Kombination mit anderen Farbstoffen zu ermöglichen.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.