PCR Cloning System with Gateway™ Technology with pDONR™221 & OmniMAX™2 Competent Cells
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Invitrogen™

PCR Cloning System with Gateway™ Technology with pDONR™221 & OmniMAX™2 Competent Cells

La tecnología Gateway™ permite una clonación rápida de uno o más genes en prácticamente cualquier sistema de expresión de lasMás información
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La tecnología Gateway™ permite una clonación rápida de uno o más genes en prácticamente cualquier sistema de expresión de las proteínas. Cuando tenga un clon de entrada, podrá recombinar el gen de interés en una serie de vectores de expresión adaptados para el uso en la tecnología Gateway™. El sistema de clonación PCR con tecnología Gateway™ está diseñado para crear un clon de entrada después de PCR con primers personalizados modificados con attB (Figura 1). El producto de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se clona de forma direccional con eficacias típicas de >99 %. El sistema de clonación PCR con tecnología Gateway™ ofrece:

• Clonación rápida, eficaz y direccional de productos de PCR
• Versatilidad para utilizar cualquier enzima de amplificación
• Clonación sin necesidad de endonucleasas de restricción o ligasa
• Selección de clones de entrada con kanamicina o Zeocin™

Además, los vectores pDONR™221 y pDONR™/Zeo tienen un origen de pUC para una alta producción de plásmidos y sitios de secuenciación M13 universales para facilitar su uso.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de clonaciónGateway™
N.º de reacciones20 reactions
Línea de productosOne Shot™
Tipo de productoSistema de clonación de PCR
Cantidad20 reacciones
VectorpDONR
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de clonación PCR con tecnología Gateway™ incluye mezcla enzimática Gateway™ BP Clonase II™ y reactivos, vectores vector Gateway™ pDONR™221 o pDONR™/Zeo, primers de secuenciación M13, solución PEG/Mg2+, proteinasa K, control positivo pEXP7-tet y células competentes células competentes One Shot™ OmniMAX™2. Almacene las células competentes y la mezcla enzimática a -80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C.

Preguntas frecuentes

Can I perform the single-step protocol for the BP/LR Clonase reaction using BP Clonase enzyme and LR Clonase enzyme instead of BP Clonase II enzyme and LR Clonase II enzyme?

In the single-step protocol for the BP/LR Clonase reaction, we would not recommend substituting the BP Clonase II/LR Clonase II enzymes with BP Clonase /LR Clonase enzymes as this would result in very low recombination efficiency.

Do you have a recommended single-step protocol for BP/LR recombination?

Yes, we have come up with a single-step protocol for BP/LR Clonase reaction (http://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/gateway-cloning.html#1), where DNA fragments can be cloned into Destination vectors in a single step reaction, allowing you to save time and money.

How can I move my gene of interest from a Gateway-adapted expression clone to a new Destination vector as I have lost the entry clone?

We would recommend performing a BP reaction with a Donor vector in order to obtain an entry clone. This entry clone can then be used in an LR reaction with the Destination vector to obtain the new expression clone.

Can I purchase the 5X LR Clonase buffer or 5X BP Clonase buffer separately?

We do not offer the 5X LR Clonase buffer and 5X BP Clonase buffer as standalone products. They are available as part of the enzyme kits.

Do you offer Gateway vectors for expression in plants?

We do not offer any Gateway vectors for expression in plants.

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