El kit de centrifugación de BSA con EDC Thermo Scientific Imject es un paquete de proteína portadora de albúmina sérica bovina purificada que permite la preparación sencilla de inmunógenos eficaces con antígenos peptídicos que contienen grupos amino o carboxilo.

La BSA es una conocida proteína portadora inmunogénica que se utiliza para la preparación de antígenos peptídicos para la inmunización y la producción de anticuerpos. Las preparaciones en tampón MES están optimizadas para la conjugación péptido-proteína portadora mediante el entrecruzador carbodiimida reactiva con grupos carboxilo denominada EDC (o EDAC). El kit de centrifugación de EDC Imject incluye unidades listas para su uso de proteína portadora BSA, tampones optimizados de reacción y columnas de centrifugación y desalado sin complicaciones para la preparación de inmunógenos con el método EDC.

Características del kit de centrifugación de BSA con EDC Imject:

• Kit práctico: contiene la proteína BSA liofilizada (en tampón MES), el entrecruzador EDC y componentes accesorios para preparar de forma sencilla inmunógenos para inyección listos para su uso
• Conjugación de alto rendimiento: cada molécula contiene 59 residuos de lisina, de los cuales, entre 30 y 35 tienen aminas primarias capaces de reaccionar con un reactivo de conjugación.
• Calidad validada: la BSA purificada (fracción V) está lista para su uso en métodos de entrecruzamiento con glutaraldehído, éster NHS o EDC.
• Solubilidad compatible: la carga neta negativa (pI 5,1) de la BSA y su alta solubilidad se deben a los numerosos grupos carboxílicos. Esto permite su uso en una amplia gama de condiciones de conjugación.
• Inmunogénica: con 67 kDa, la BSA es lo suficientemente grande como para funcionar como inmunógeno primario o puede usarse como portador de proteínas irrelevantes para el cribado de los anticuerpos y los inmunoensayos después de usar KLH como proteína portadora para generar la respuesta inmunitaria al hapteno.

Las proteínas portadoras son moléculas grandes y complejas capaces de estimular una respuesta inmunitaria tras su inyección. La producción satisfactoria de anticuerpos específicos frente a antígenos pequeños (es decir, péptidos o compuestos farmacológicos) requiere que estos haptenos se conjuguen covalentemente con una molécula más grande y más compleja (normalmente una proteína) para hacerlos inmunogénicos. Las proteínas portadoras se seleccionan en función de su inmunogenicidad, su solubilidad y la posibilidad de lograr una adecuada conjugación hapteno-portador. La BSA Imject es muy soluble en tampones acuosos y contiene numerosas aminas primarias y grupos carboxilo que pueden servir como elemento diana de la conjugación con glutaraldehído, ésteres NHS, EDC y otros reactivos de entrecruzamiento. Imject BSA se purifica y liofiliza en tampones que optimizan su estabilidad y solubilidad para la conjugación de haptenos.

La albúmina sérica bovina (BSA) es una proteína idónea para una gran variedad de usos en el laboratorio porque, al igual de la mayoría de las proteínas plasmáticas abundantes, es muy estable y soluble. Además, la proteína 67 kDa es lo bastante grande y compleja como para ser totalmente inmunógena. Por tanto, la BSA es una proteína portadora muy utilizada para la conjugación con haptenos y otros antígenos débiles para hacerlos más inmunogénicos con el fin de producir anticuerpos. También proporciona una proteína portadora de haptenos independiente para las microplacas y otras técnicas de ensayo necesarias para el cribado de anticuerpos producidos con KLH u otro portador más inmunogénico.

El entrecruzador carbodiimida EDC conjuga haptenos que contienen carboxilo (por ejemplo, el extremo C de los antígenos peptídicos) con la proteína portadora BSA. Este método de preparación de inmunógenos es idóneo para antígenos peptídicos con pocos o ningún resto de ácido aspártico y glutámico (carboxilatos) y de restos de lisina (aminas primarias) en la parte central de la secuencia primaria. Dado que los péptidos contienen tanto carboxilatos como aminas, la conjugación mediante EDC tiene como resultado su polimerización en distinto grado y una orientación aleatoria en su adhesión a la proteína portadora. Normalmente, esto da lugar a un alto nivel de carga antigénica en la proteína portadora, así como la presentación en todas las orientaciones posibles para la producción de anticuerpos. No obstante, los epítopos importantes (los que se desea detectar) de la secuencia peptídica del antígeno pueden bloquearse mediante la conjugación mediada por EDC si esas regiones contienen aminas primarias (restos de lisina) o carboxilatos (restos de ácido aspártico y glutámico). En estos casos, utilice un entrecruzador reactivo de amina hobiofuncional con la BSA purificada en tampón de fosfato o sintetizar el péptido con una cisteína terminal exclusiva y utilice un kit con BSA activada por malemida para preparar el conjugado de proteína portadora.

Más datos del producto
• Datos de activación y conjugación de proteínas del portador para la preparación de inmunógenos

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