Características y ventajas de la limpieza del producto de PCR ExoSAP-IT™
•Conserva las muestras de PCR— Recuperación completa de productos de PCR largos y cortos
•Limpieza de PCR de un solo paso/tubo— Añada el reactivo ExoSAP-IT directamente al producto de PCR
•Elimina las columnas de centrifugación— Disminuye el tiempo y el gasto al mismo tiempo que aumenta el rendimiento
•Elimina los cebadores contaminantes y los dNTP— Sin interferencias en aplicaciones posteriores
•Escalable — Económico para la purificación de alto rendimiento
•Procesamiento sencillo— Fácil robótica; reemplaza las microesferas, las filtraciones y las placas
•Genera menos residuos que las columnas

El reactivo ExoSAP-IT está diseñado para una limpieza de PCR sencilla y rápida para aplicaciones posteriores, como la secuenciación de ADN o el análisis de polimorfismo de nucleótido único (SNP).Cuando se completa la amplificación por PCR, cualquier dNTP y cebadores que no se hayan consumido de la mezcla de productos de PCR interferirán con estos métodos.ExoSAP-IT elimina estos contaminantes.

ExoSAP-IT se añade directamente al producto PCR y se incuba a 37 °C durante 15 minutos (Fig. 1).Después del tratamiento de PCR, ExoSAP-IT se inactiva calentándolo a 80 °C durante 15 minutos.

La limpieza de PCR de un solo paso ExoSAP-IT utiliza dos enzimas hidrolíticas, la exonucleasa I y la fosfatasa alcalina de camarón (SAP), conjuntamente en un tampón especialmente formulado para eliminar los dNTP y cebadores no deseados de los productos de PCR.La exonucleasa I elimina los cebadores monocatenarios residuales y cualquier ADN monocatenario extraño producido en la PCR.La SAP elimina los dNTP restantes de la mezcla de PCR.

Protocolo de limpieza de productos de PCR rápida
ExoSAP-IT requiere solo un paso de pipeteo y dos incubaciones.Solo tiene que añadir ExoSAP-IT al producto de PCR y, en un plazo de 30 minutos, se puede realizar la secuenciación o el análisis de SNP.

Sencillo:Un solo paso
El método está diseñado para requerir un mínimo de tiempo ‘práctico’.La eliminación enzimática de cebadores excesivos y nucleótidos no incorporados se produce en un sencillo paso mediante el uso de reactivos ExoSAP-IT en un solo tubo o pocillo de microtitulación.Solo se requieren transferencias sencillas de pipetas; por lo tanto, muchas de las muestras se pueden procesar a la vez, ya sea manualmente o mediante robótica.

Sin pérdida de muestras
El uso de reactivos ExoSAP-IT elimina todas las purificaciones de gel o columna, sedimentaciones, filtraciones, microesferas o separaciones magnéticas.Hay una recuperación del 100 % de productos de PCR largos y cortos con ExoSAP-IT (Fig- 2).

Consiga una alta calidad de datos a partir de productos de PCR
El reactivo ExoSAP-IT puede utilizarse como un método eficaz de limpieza antes de la secuenciación de ADN fluorescente o radiactiva, el análisis de SNP o cualquier otra aplicación que requiera un producto de PCR libre de exceso de nucleótidos y primer.

Referencias:
DUGAN, K. A., LAWRENCE, H. S., HARES, D. R., FISHER, C. L. AND BUDOWLE B. (2002) J. Forensic Sci47, 811-818.
HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques17, 858-860.

MU, J., DUAN, J., MAKOVA, K., JOY, D., HUYNH, C., BRANCH, O., LI, W. AND SU, X. (2002) Nature418, 323-326.
SILVA, JR., W. A., COSTA, M. C. R., VALENTE, V., DE FREITAS SOUSA, J., PACÓ-LARSON, M. L., ESPREAFICO, E. M., CAMARGO, S. S., MONTEIRO, E., DE JESUS, A., HOLANDA, M. A., ZAGO, M. A., SIMPSON, A. J. G. AND NETO, E. D. (2001) BioTechniques30, 537-542.
WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res.22, 4354-4355.